二甲雙胍對膽管癌細胞株RBE的作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　 檢測不同濃度二甲雙胍及二甲雙胍聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C對人肝膽管癌RBE細胞的增殖、凋亡和周期分布的影響，研究AMPK及mTOR在膽管癌RBE細胞中的活性變化，初步探討其可能的分子生物學機制。
　　 方法:
　　 1.MTT檢測不同濃度二甲雙胍對人肝膽管癌RBE細胞增殖的影響:體外培養(yǎng)膽管癌RBE細胞，MTT法檢測濃度為0、5、10、20、30 mmol/L的二甲雙胍及各組（對照組、2

2、0 mmol/L二甲雙胍、20umol/L Compound C組、20 umol/L Compound C+20 mmol/L二甲雙胍組）作用于RBE細胞后24小時、48小時、72小時的存活率;
　　 2.流式細胞術檢測不同濃度二甲雙胍干預后細胞周期分布和細胞凋亡率:流式細胞術檢測濃度為0、5、10、20、30 mmol/L的二甲雙胍及各組（對照組、20 mmol/L二甲雙胍、20 umol/L Compound C組、20

3、umol/L Compound C+20 mmol/L二甲雙胍組）作用于膽管癌RBE細胞48小時后各組細胞周期分布和細胞凋亡率;
　　 3.檢測不同濃度二甲雙胍干預后AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR的變化:Western Blot檢測各組濃度為0、5、10、20、30 mmol/L的二甲雙胍及各組（對照組、20 mmol/L二甲雙胍、20u mol/LCompound C組、20 umol/L Compound C

4、+20mmol/L二甲雙胍組）作用于膽管癌RBE細胞48小時后各組細胞中AMPK、磷酸化的AMPK(Thr172)和mTOR、磷酸化的mTOR(Ser2448)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT法結(jié)果顯示:隨著二甲雙胍濃度的增加，各組細胞存活率明顯降低，10、20、30 mmol/L二甲雙胍48h組存活率明顯低于24小時組，二甲雙胍聯(lián)合Compound C作用時，與對照組間無顯著差異;
　　 2.流式細胞術

5、結(jié)果顯示:隨著二甲雙胍濃度的增加，各組細胞G0/G1細胞逐漸增加，S期細胞逐漸減少，早期凋亡率逐漸增加，甲雙胍聯(lián)合Compound C作用時，與對照組間無顯著差異;
　　 3.Western Blot結(jié)果顯示:隨著二甲雙胍濃度的增加，各組間AMPK、mTOR的表達量無顯著性差異，而隨著二甲雙胍濃度的增加， p-AMPK的表達量隨之增加，p-mTOR的表達量則隨之減少。在二甲雙胍聯(lián)合Compound C組，p-AMPK及p-mTO