萵苣過氧化物酶基因克隆及其在種子萌發(fā)中的功能研究.pdf

1、隨著ROS（O2?—、?OH、H2O2等）在細胞壁松弛中作用的確立，過氧化物酶（Peroxidase，POD）作為參與合成調節(jié) ROS的主要酶類一直被人們所熱議。已報道的多篇文章都提出POD在種子萌發(fā)和胚根伸長中活性發(fā)生了變化，POD是否在種子萌發(fā)中起作用，起什么作用，與胚根伸長和胚乳弱化各有什么關系，都不是很清楚，所以本文主要針對POD在種子萌發(fā)中發(fā)揮的功能而作出研究。
　　本文以萵苣（Lactuca sativaL.）種子為材

2、料，用分光光度法檢測在不同萌發(fā)介質中，胚根（Radical，RAD）和胚乳帽(Endosperm cap，CAP)中POD酶活性變化。在水中萌發(fā)時，RAD和CAP的POD酶活均表現出持續(xù)升高，且CAP中酶活明顯高于RAD。在0.3％二氯異氰尿酸鈉（Sodium dichloroisocyanurate，SDIC）溶液中萌發(fā)的種子，其完成萌發(fā)的起始時間點推遲，RAD中POD酶活性未變，CAP中酶活性顯著下降。在水楊羥肟酸（Salicylh

3、ydroxamic acid，SHAM）的0.3mM水溶液中萌發(fā)的種子，起始萌發(fā)時間點提前，CAP與RAD共同表現出POD酶活性的顯著下降。用3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine，TMB）組織染色POD結果顯示，POD存在于整個胚乳和胚根部位，各部分的染色深淺變化與分光光度計測得 POD酶活性變化一致。
　　通過搜索得到POD EST序列，用cDNA末端快速克?。≧apid

4、-amplification of cDNA ends，RACE）的技術擴增出該POD的完整cDNA，全長1259bp，并命名為LsPOD1。利用實時定量聚合酶鏈式反應（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）技術,檢測三種萌發(fā)介質中不同吸脹時間的RAD和CAP中POD轉錄水平的表達。結果顯示，在水中吸脹的種子中，CAP和RAD的LsPOD1表達量都隨著吸脹時間的