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文檔簡介
1、隨著ROS(O2?—、?OH、H2O2等)在細胞壁松弛中作用的確立,過氧化物酶(Peroxidase,POD)作為參與合成調節(jié) ROS的主要酶類一直被人們所熱議。已報道的多篇文章都提出POD在種子萌發(fā)和胚根伸長中活性發(fā)生了變化,POD是否在種子萌發(fā)中起作用,起什么作用,與胚根伸長和胚乳弱化各有什么關系,都不是很清楚,所以本文主要針對POD在種子萌發(fā)中發(fā)揮的功能而作出研究。
本文以萵苣(Lactuca sativaL.)種子為材
2、料,用分光光度法檢測在不同萌發(fā)介質中,胚根(Radical,RAD)和胚乳帽(Endosperm cap,CAP)中POD酶活性變化。在水中萌發(fā)時,RAD和CAP的POD酶活均表現出持續(xù)升高,且CAP中酶活明顯高于RAD。在0.3%二氯異氰尿酸鈉(Sodium dichloroisocyanurate,SDIC)溶液中萌發(fā)的種子,其完成萌發(fā)的起始時間點推遲,RAD中POD酶活性未變,CAP中酶活性顯著下降。在水楊羥肟酸(Salicylh
3、ydroxamic acid,SHAM)的0.3mM水溶液中萌發(fā)的種子,起始萌發(fā)時間點提前,CAP與RAD共同表現出POD酶活性的顯著下降。用3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine,TMB)組織染色POD結果顯示,POD存在于整個胚乳和胚根部位,各部分的染色深淺變化與分光光度計測得 POD酶活性變化一致。
通過搜索得到POD EST序列,用cDNA末端快速克?。≧apid
4、-amplification of cDNA ends,RACE)的技術擴增出該POD的完整cDNA,全長1259bp,并命名為LsPOD1。利用實時定量聚合酶鏈式反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技術,檢測三種萌發(fā)介質中不同吸脹時間的RAD和CAP中POD轉錄水平的表達。結果顯示,在水中吸脹的種子中,CAP和RAD的LsPOD1表達量都隨著吸脹時間的
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