系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清及骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液TGF-β1水平及臨床意義的研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythema．tosus，SLE)是一種以免疫調(diào)節(jié)紊亂為特征的自身免疫病，其主要表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)的過(guò)渡激活和紊亂以及由此產(chǎn)生大量的自身反應(yīng)性抗體。研究發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞因子的異常對(duì)SLE的發(fā)展及其轉(zhuǎn)歸具有十分重要的意義，但對(duì)具有抑制免疫和炎癥的細(xì)胞因子一轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)的研究較少。TGF-β1是一種有效的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)因子

2、，可作用于免疫系統(tǒng)的各個(gè)環(huán)節(jié)，如抑制多種免疫細(xì)胞的增殖分化和細(xì)胞因子的分泌，抑制B細(xì)胞分泌IgG及IgM和抑制抗原遞呈細(xì)胞(APC)表面MHCⅠ類及Ⅱ類分子表達(dá)等。體外研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1抑制T、B淋巴細(xì)胞的增殖和分化，TGF-β1的降低使得淋巴細(xì)胞的激活增加，導(dǎo)致致敏T淋巴細(xì)胞和多種自身抗體的產(chǎn)生，而發(fā)生自身免疫性疾病。敲除了TGF-β1基因的小鼠的癥狀與人SLE、干燥綜合征極其類似，可出現(xiàn)多臟器炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，外周血中可檢測(cè)到抗dsD

3、NA、抗ssDNA及其它抗核抗體等。因此推測(cè)它的免疫抑制功能在SLE的發(fā)病中起到一定作用。 骨髓由造血干細(xì)胞(HSCs)和骨髓造血微環(huán)境組成，構(gòu)成骨髓造血微環(huán)境的核心是骨髓基質(zhì)細(xì)胞，骨髓基質(zhì)細(xì)胞是由成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等構(gòu)成，具有支持造血和免疫調(diào)節(jié)功能，并能分泌多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，TGF-β1為骨髓基質(zhì)細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子之一。有學(xué)者提出SLE不僅存在HSCs異常，而且還存在骨髓基質(zhì)細(xì)胞異常。具體表現(xiàn)

4、為狼瘡鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞不能支持正常鼠HSCs生長(zhǎng)，異基因HSCs和骨髓基質(zhì)細(xì)胞共移植時(shí)，狼瘡鼠生存明顯延長(zhǎng)，且能預(yù)防移植物宿主病(GVHD)，免疫和造血重建快：人活動(dòng)期SLE患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞上清液對(duì)正常及自身骨髓HSCs具有抑制作用。另有文獻(xiàn)提示SLE患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)淋巴細(xì)胞的增殖有抑制作用，這種抑制作用比正常人弱，在SLE患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中加入TGF-β1的單抗后，抑制作用明顯減弱，由此推測(cè)SLE患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞存

5、在分泌TGF-β1缺陷，并且TGF-β1在骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液的免疫抑制功能中起著重要作用。但是SLE患者體內(nèi)的TGF-β1水平如何；不同活動(dòng)指數(shù)的SLE患者體內(nèi)TGF-β1水平如何；是否與SLE活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)有關(guān)； SLE患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)情況如何，及其分泌TGF-B1的水平如何；目前研究較少，本實(shí)驗(yàn)希望通過(guò)對(duì)SLE患者血清及骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1水平的研究，探討SLE的發(fā)病機(jī)制，為SLE的治療提供新的思路

6、和方法。 材料和方法 1材料 1、l血清標(biāo)本采自我院血液風(fēng)濕科住院及門診的SLE患者，診斷均符合1982年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并以自愿獻(xiàn)血的健康人作為對(duì)照組． 1、2骨髓標(biāo)本采自我院血液風(fēng)濕科住院貧血SLE患者，診斷均符合1982年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并以缺鐵性貧血的患者作為對(duì)照組。 2、實(shí)驗(yàn)步驟及方法2、1血清標(biāo)本采集：取符合條件的患者及對(duì)照組外周靜脈血3ml，于

7、6小時(shí)內(nèi)分離血清，-20℃凍存待用。 2、2骨髓標(biāo)本采集：取符合條件的患者及對(duì)照組骨髓液3ml(肝素抗凝20IU/ml)，于6小時(shí)內(nèi)，密度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)，并應(yīng)用骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行4周細(xì)胞培養(yǎng)，取其上清液，-20℃凍存待用。 2、3用雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)對(duì)上述血清、骨髓標(biāo)本中的TGF-β1進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)測(cè)定SLE患者疾病活動(dòng)性指標(biāo)(血沉、補(bǔ)體C3)。 3、統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)

8、數(shù)據(jù)以Means±SD表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，兩者間關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。以上均采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包完成。 結(jié)果 1、體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)：活動(dòng)期SLE組骨髓基質(zhì)細(xì)胞于培養(yǎng)第1周出現(xiàn)；2-3周，基質(zhì)細(xì)胞數(shù)逐漸增多；4周時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)比較旺盛，鋪滿約85﹪-90﹪培養(yǎng)瓶底。而對(duì)照組基質(zhì)細(xì)胞于培養(yǎng)第5天開始出現(xiàn)，2周時(shí)已明顯增多，3周時(shí)細(xì)胞彼此相接，4周時(shí)幾乎完全融合。 2、SLE患者組血

9、清TGF-β1水平低于對(duì)照組(p<0.01)；輕度SLE患者組血清TGF-β1水平較對(duì)照組減低(p

10、義。 5、活動(dòng)期SLE患者骨髓上清液中TGF-β1水平較對(duì)照組減低(p<0.05)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1 SLE患者血清TGF-β1水平處于低水平，且其水平越低，SLE患者病情越重。 2、SLE患者血清TGF-β1水平與血沉呈負(fù)相關(guān)，與補(bǔ)體C3呈正相關(guān)。 3、活動(dòng)期SLE患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)速度較對(duì)照組慢，且分泌TGF-β1水平明顯減低，推測(cè)SLE患者可能存在骨髓基質(zhì)細(xì)胞的異常。 4、TGF-β