寄主為夾竹桃的紅花桑寄生提取物（Nispex）的抗腫瘤作用及其成分研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重困擾人類健康。由于目前臨床常用抗腫瘤藥物大多存在嚴(yán)重的毒副作用以及腫瘤細(xì)胞耐藥性的問題，不斷尋找新的高效低毒的抗腫瘤藥物一直是抗腫瘤研究的重要課題。從植物中尋找天然抗腫瘤活性成分是研究抗腫瘤藥物的一條重要途徑，目前臨床上常用的抗腫瘤藥物如紫杉醇、長春新堿、喜樹堿、足葉乙苷、三尖杉酯堿均來源于植物。除了從植物中分離單一結(jié)構(gòu)的藥物成分外，傳統(tǒng)的植物藥物近幾年來在德國、法國、意大利和瑞士等歐洲國家也得到了科學(xué)界的承認(rèn)和應(yīng)用。由于腫

2、瘤發(fā)生發(fā)展的多因性，針對腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的多種分子靶標(biāo)、多種信號途徑進(jìn)行腫瘤的聯(lián)合治療可能會比單一藥物成分的治療有更好的治療效果。而植物藥的特點(diǎn)正是藥效物質(zhì)多成分、多途徑、多靶點(diǎn)的綜合作用。將抗腫瘤植物藥作為傳統(tǒng)化療藥物的增效減毒劑應(yīng)用于惡性腫瘤的治療是今后抗腫瘤研究的重要方向之一。 Nispex是首次從寄主為夾竹桃的紅花桑寄生葉中提取分離的主要含多酚類成分的一種抗腫瘤植物提取物。文章分四個部分對其制備方法、成分、體內(nèi)外抗白血

3、病細(xì)胞株HL-60的效果、抑瘤機(jī)制、抑瘤作用的廣譜性等進(jìn)行了研究，還研究對比了不同寄主來源紅花桑寄生提取物的體外抑瘤效果。 第一部分為Nispex的制備方法和成分分析。Nispex系寄主為夾竹桃的紅花桑寄生葉80％乙醇提取物經(jīng)聚酰胺柱層析純化所得，按藥材重量計(jì)得率約為3％。采用顏色鑒定反應(yīng)、高效液相．質(zhì)譜聯(lián)用分析和資料對比分析，Nispex中主要含槲皮素、槲皮苷、廣寄生苷等黃酮類成分和與夾竹桃成分類似的強(qiáng)心苷類成分以及生物堿類成

4、分。以蘆丁為對照品測得的黃酮含量為72.37％。 第二部分為本文的重點(diǎn)研究部分。測定了Nispex對小鼠的近似LD<,50>，在此基礎(chǔ)上以人急性髓系白血病細(xì)胞株HL-60為模型，研究了Nispex的體內(nèi)外抑瘤效果及其與多柔比星聯(lián)用的體內(nèi)抑瘤效果，并探討了其可能的抑瘤作用機(jī)制。用MTT法和集落形成實(shí)驗(yàn)檢測了Nispex對HL-60細(xì)胞增殖的抑制活性。Nispex顯著地抑制HL-60細(xì)胞增殖，表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系和時效關(guān)系。藥物作用

5、48 h的IC<,50>值為0.54μg/ml。集落形成實(shí)驗(yàn)表明Nispex對腫瘤增殖細(xì)胞群作用更為敏感。Nispex對正常人骨髓單個核細(xì)胞無抑制作用。病理檢查各主要臟器無明顯異常。Nispex對小鼠的近似LD<,50>為126.81 mg/kg，主要表現(xiàn)為心臟毒性。采用AO/EB熒光染色、Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測、DNA倍體分析及細(xì)胞周期分析、TdT酶介導(dǎo)的原位缺口標(biāo)記法和細(xì)胞DNA片段化檢測證明Nisp

6、ex對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用主要表現(xiàn)為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，研究結(jié)果還顯示Nispex抑制HL-60細(xì)胞增殖主要是通過將細(xì)胞周期阻滯于G<,0>/G<,1>期。EMSA分析、Western Blot分析和免疫熒光分析顯示Nispex是一種天然NF-кB抑制劑。Nispex的抗腫瘤活性可能與其抑制腫瘤細(xì)胞核中NF-кB的異常激活及抑制腫瘤細(xì)胞分泌VEGF有關(guān)。 第三部分研究了Nispex的廣譜抗腫瘤作用。Nispex對小鼠肉瘤細(xì)胞株S180、

7、小鼠黑色素瘤細(xì)胞株B16等4種鼠源腫瘤細(xì)胞株和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞株3T3等均無細(xì)胞毒活性。而Nispex對所檢測的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H446、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat、人急性早幼粒白血病細(xì)胞株NB4、人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562、人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Molt4、人鼻咽癌細(xì)胞株CNE和人骨髓瘤細(xì)胞株U266等8種人源腫瘤細(xì)胞株均有較強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)

8、系和時效關(guān)系，其作用72 h時的IC<,50>值在0.1～2.5μg/ml之間。對原代培養(yǎng)的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞也有良好的抑制作用，其作用72 h時的IC<,50>值為2.48μg/ml。Nispex對有輕微致瘤性的人胚腎成纖維細(xì)胞株293T有抑制細(xì)胞增殖的作用，但未發(fā)現(xiàn)存在明顯的量效關(guān)系，即使高達(dá)50μg/ml的濃度也不明顯誘導(dǎo)其凋亡。細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)表明，與HL-60中的情況一樣，Nispex對NB4和Jurkat中的增殖細(xì)胞群作用

9、更為敏感。 第四部分以培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞為模型，比較了寄主分別為夾竹桃、桑樹、無患子和桂花的紅花桑寄生提取物的體外抑瘤效果。夾竹桃寄生抑制腫瘤細(xì)胞增殖的效果最好，桑樹寄生抑制腫瘤細(xì)胞增殖的效果次之，無患子寄生又次之，桂花寄生在檢測的濃度范圍內(nèi)基本無抑制作用。 以上的研究證明，寄主為夾竹桃的紅花桑寄生葉提取物Nispex是一種有效的抗腫瘤植物提取物，對人源腫瘤細(xì)胞有較好的選擇性。與腫瘤化療藥物多柔比星聯(lián)用有很好的協(xié)同效果