抵抗素通過p65-K8抑制HepG2細(xì)胞中糖原的累積.pdf

1、作為肥胖和胰島素抵抗之間重要鏈接的脂肪組織特異性分泌因子抵抗素Resistin，可以降低胰島素敏感性，抑制胰島素刺激引起的葡萄糖攝取，其內(nèi)在的機(jī)制受多種信號(hào)途徑的調(diào)控。Keratin是典型的上皮細(xì)胞中間絲蛋白。作為上皮細(xì)胞骨架的組成部分，Keratin不僅在維持上皮細(xì)胞和組織的穩(wěn)定與完整性方面起著重要作用。而且一些Keratins還具有調(diào)節(jié)功能參與細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)控，在癌癥診斷中可作為標(biāo)志物，在臨床應(yīng)用中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，作為Ke

2、ratin家族重要一員的Keratin8在糖代謝方面也發(fā)揮著重要作用。在小鼠正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中敲除K8/K18后，能促進(jìn)細(xì)胞中胰島素刺激引起的葡萄糖積累，但其機(jī)制并不清楚，尤其是Keratin8介導(dǎo)的Resistin對(duì)糖代謝的影響。本文通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)及染色質(zhì)免疫共沉淀等方法較系統(tǒng)的研究了HepG2細(xì)胞中Keratin8對(duì)糖代謝的影響及Resistin對(duì)Keratin8基因表達(dá)的調(diào)控作用。獲得如下結(jié)果:

3、
　　1、細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和基因敲減結(jié)果證明，Resistin抑制HepG2細(xì)胞中糖原的積累，敲減Keratin8能夠促進(jìn)糖原的積累，同時(shí)能回復(fù)Resistin對(duì)糖原積累的抑制作用。
　　2、生物信息學(xué)方法分析表明，Keratin8基因啟動(dòng)子區(qū)具有典型的p65結(jié)合元件。雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)及ChIP實(shí)驗(yàn)分析證明，p65可與Keratin8啟動(dòng)子特異結(jié)合上調(diào)Keratin8的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。
　　3、不同濃度重組Resistin處理