SELDI蛋白芯片技術(shù)在重型顱腦創(chuàng)傷傷情預(yù)測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：創(chuàng)傷性腦損傷（Traumatic Brain Injury，TBI）常誘發(fā)一系列分子事件，這些事件可導(dǎo)致快速的細(xì)胞死亡、炎癥、水腫和顱內(nèi)高壓，成為病人致死和傷殘的重要原因，也給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。新近發(fā)展的蛋白質(zhì)組學(xué)，特別是神經(jīng)蛋白質(zhì)組學(xué)，為從全面認(rèn)識(shí)創(chuàng)傷性腦損傷的疾病演進(jìn)過(guò)程和發(fā)生發(fā)展機(jī)制，尋找診斷指標(biāo)，預(yù)測(cè)疾病預(yù)后提供了可能條件。表面增強(qiáng)激光解析離子化（Surface Enhanced Laser Desorpt

2、ion-Ionization，SELDI）蛋白芯片技術(shù)是新近發(fā)展用于快速檢測(cè)復(fù)雜蛋白組分生物樣本，如血清、腦脊液或尿液等的一門蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，具有快速、簡(jiǎn)便易行且高通量等優(yōu)點(diǎn)，能直接篩選出與疾病相關(guān)的多種潛在生物標(biāo)記物。本研究以重型顱腦創(chuàng)傷患者血清為研究對(duì)象，利用表面增強(qiáng)激光解析離子化SELDI蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)不同格拉斯哥評(píng)分（GCS）的sTBI患者血清蛋白質(zhì)譜差異變化，分析SELD1檢測(cè)結(jié)果與sTBI患者傷情程度的相關(guān)性，以期對(duì)臨床患

3、者傷情作出及時(shí)準(zhǔn)確、判斷。
　　 方法：70例sTBI病人血清樣本獲取于武警醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腦系科中心2008年6月至11月收住院病人，其中GCS3～4分者24例、GCS5～6分者29例和GCS7～8分者17例，對(duì)照組50例健康人血清標(biāo)本來(lái)自武警醫(yī)學(xué)院接受體檢的學(xué)員。病人選擇標(biāo)準(zhǔn)：20～45歲，性別不限，GCS3～8分，不伴有其它臟器嚴(yán)重創(chuàng)傷和骨折，無(wú)其它重要臟器功能衰竭，無(wú)風(fēng)濕或腎小球腎炎等免疫系統(tǒng)疾病。利用弱陽(yáng)離子芯片CM10

4、和表面增強(qiáng)激光解析離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜（surface enhanced laser desorption-ionization time-of-fight mass spectrometry， SELDI-TOF-MS）技術(shù)篩選sTBI患者血清中的差異表達(dá)蛋白，應(yīng)用Cluster3.0分析軟件制作分層聚類（Hierarchical clustering）圖譜，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)解析SELDI蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果；應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析

5、差異蛋白質(zhì)峰強(qiáng)度與sTBI患者GCS的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：樣品血清中共獲得101個(gè)有效蛋白質(zhì)峰，其中27個(gè)峰比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），13個(gè)在sTBI患者中表達(dá)明顯升高，分別為4800，m/z4895，m/z4973，m/z5323，m/z5718， m/z5744， m/z11415， m/z11555， m/z11661， m/z11702，m/z11904，m/z16348，m/z22089，14個(gè)在sTBI患

6、者中表達(dá)明顯降低，分別為m/z3941，m/z4098，m/z4184，m/z4295，m/z4652， m/z5076， m/z5646， m/z5917， m/z8714， m/z8792， m/z13808，m/z14021，m/z22947，m/z28184。經(jīng)過(guò)對(duì)27個(gè)差異蛋白質(zhì)表達(dá)強(qiáng)度與sTBI患者GCS間的相關(guān)性進(jìn)行分析，共發(fā)現(xiàn)2個(gè)差異蛋白質(zhì)（m/z4973和m/z5323）峰強(qiáng)度與sTBI的GCS呈負(fù)相關(guān)，6個(gè)（m/z3

7、941，m/z4295，m/z8714，m/z8792，m/z14020和m/z28184）峰強(qiáng)度與sTBI的GCS呈正相關(guān)。通過(guò)對(duì)SELDI蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行聚類分析，得出sTBI患者GCS3～4分組與GCS5～6分組關(guān)系最為緊密，GCS7～8分組次之，與健康對(duì)照組關(guān)系最為疏遠(yuǎn)，這一分析結(jié)論符合臨床病情分級(jí)和實(shí)際內(nèi)容，說(shuō)明該組檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)可靠性。經(jīng)過(guò)對(duì)27個(gè)差異蛋白質(zhì)的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其結(jié)果與分層聚類圖譜顯示結(jié)果基本一致

8、，但后者更為直觀，提供相關(guān)性的信息量更大。此外，通過(guò)聚類把功能相近的同質(zhì)性蛋白質(zhì)分為一群，利用已知蛋白的功能信息推測(cè)未知蛋白的功能或已知蛋白的未知功能，或在疾病演進(jìn)的分子通路研究中，對(duì)同群蛋白質(zhì)進(jìn)行同步檢測(cè)，將有助于分子通路研究的產(chǎn)出率。這些差異蛋白質(zhì)在sTBI病情演進(jìn)過(guò)程中可能具有相同或相近的功能，或共同參與疾病的同一分子病理通路。
　　 結(jié)論：（1）本實(shí)驗(yàn)共得到27個(gè)有意義的差異蛋白質(zhì)峰，其中13個(gè)在sTBI患者中表達(dá)升高，

9、14個(gè)表達(dá)下調(diào)。將上述有意義的差異蛋白質(zhì)檢測(cè)峰聯(lián)合應(yīng)用于sTBI患者的傷情程度預(yù)測(cè)，有可能為從分子機(jī)制水平客觀地制定sTBI傷情程度等級(jí)提供新的方法。（2）通過(guò)對(duì)27個(gè)差異蛋白質(zhì)在不同GCS組患者血清中的表達(dá)強(qiáng)度與sTBI患者的GCS進(jìn)行相關(guān)性分析，共發(fā)現(xiàn)8個(gè)差異蛋白質(zhì)。這8個(gè)檢測(cè)蛋白質(zhì)在sTBI病情發(fā)展中可能扮演重要角色，并可能成為新的治療靶點(diǎn)。（3） SELDI蛋白芯片技術(shù)能夠直接從未經(jīng)處理的生物樣品中獲取蛋白質(zhì)圖譜，克服了傳統(tǒng)2-