海昆腎喜對(duì)5-6腎切除大鼠腎小球硬化血小板源性生長(zhǎng)因子-BB調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、腎小球硬化(glomerulosclerosis，GS)是慢性腎衰竭(Chronic RenalFailure，CRF)的主要病理基礎(chǔ)之一，如何防治GS已成為CRF防治研究的重要課題之一。GS的發(fā)生機(jī)制主要包括腎小球血流動(dòng)力學(xué)改變、腎小球固有細(xì)胞的損傷、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞因子異常分泌及細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)的過(guò)度積聚。血小板源性生長(zhǎng)因子-BB(platelet-derived growth fa

2、ctor-BB，PDGF-BB)作為一種重要的生長(zhǎng)因子其作用貫穿GS的始終，故研究其作用機(jī)理和阻斷途徑有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。 PDGF是由血小板、單核巨噬細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞(glomerular mesangialcells，GMCs)和腎小管上皮細(xì)胞等分泌的多肽生長(zhǎng)因子。其家族成員包括PDGF-AA、BB、CC和DD，其中PDGF-BB在GS中起著尤為重要的作用。PDGF-BB的主要的生理作用是促進(jìn)DNA合成，其在病理狀態(tài)下由

3、單核巨噬細(xì)胞和腎組織固有細(xì)胞過(guò)度分泌，通過(guò)促進(jìn)GMCs增殖與分泌ECM增多、和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,1>(transforming growth factor-β<,1>，TGF-β<,1>)發(fā)揮協(xié)同作用等途徑，從而導(dǎo)致GS的發(fā)生發(fā)展。 海昆腎喜是治療慢性腎衰竭的國(guó)家二類中藥新藥。前期臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該藥可有效延緩慢性腎衰竭的進(jìn)展。但其保護(hù)腎臟的作用機(jī)理尚不十分明確。我們采用5/6腎切除大鼠GS模型，探討其通過(guò)PDGF-BB途徑

4、防治GS的作用機(jī)理，為應(yīng)用其防治GS提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的 本文采用5/6腎切除GS大鼠模型，從整體動(dòng)物、器官、組織、細(xì)胞、分子水平研究海昆腎喜的作用機(jī)制。 方法 1 雄性SD大鼠，行5/6腎切除術(shù)，分為正常組、假手術(shù)組、模型組、苯那普利組、尿毒清組和海昆腎喜組。苯那普利組和尿毒清組是陽(yáng)性藥物組。期間每隔4周測(cè)大鼠體重和尿蛋白。術(shù)后第15周取血測(cè)定BUN、Scr、Cho、TG和LDL的含量，并取腎做HE染色

5、、六胺銀染色、Mallory染色、Masson染色觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)變化。 2 采用免疫組化方法檢測(cè)大鼠腎組織中PDGF-BB蛋白，采用原位雜交方法檢測(cè)大鼠腎組織中PDGF-BB mRNA的表達(dá)。 3 LPS刺激體外培養(yǎng)GMCs，給予相應(yīng)治療藥物進(jìn)行干預(yù)。采用MTT法檢測(cè)GMCs在LPS刺激12h、24h、48h和60h的增殖效應(yīng)；采用細(xì)胞爬片和western blot法檢測(cè)PDGF-BB蛋白的含量；采用RT-PCR法

6、檢測(cè)PDGF-BB mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1 海昆腎喜可以減少5/6腎切除腎小球大鼠的大量蛋白尿排泄，降低實(shí)驗(yàn)大鼠的Scr和BUN水平，改善實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織的病理學(xué)損害。 2 海昆腎喜能降低5/6腎切除腎小球大鼠腎組織PDGF-BB蛋白及其mRNA的表達(dá)。 3 海昆腎喜能抑制LPS誘導(dǎo)下的GMCs增殖及其過(guò)度表達(dá)PDGF-BB蛋白和mRNA。 結(jié)論 海昆腎喜可改善5/6腎切除模型大鼠的腎組