狼瘡方2號(hào)對(duì)BXSB狼瘡鼠的免疫影響及療效評(píng)價(jià).pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志CD4、CCR3和CD95來(lái)進(jìn)一步證實(shí)SLE的Th2細(xì)胞優(yōu)勢(shì)學(xué)說(shuō)及存在的凋亡異常，通過(guò)中藥狼瘡方2號(hào)(LCF-2)對(duì)BXSB狼瘡鼠的藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)，觀察其對(duì)Th1/Th2細(xì)胞平衡的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)外周血及脾臟Th2細(xì)胞凋亡的影響，探討其可能的作用機(jī)理。方法：①選取11-12周齡的BXSB狼瘡鼠18只將它們隨機(jī)分成3組，分別用中藥狼瘡方2號(hào)、強(qiáng)的松及等量蒸餾水灌胃給藥，前兩組為治療組后一組為狼瘡鼠對(duì)照組，同

2、時(shí)選取同齡C57BL/6小鼠6只作為正常鼠對(duì)照組，并給予等量的蒸餾水灌胃，給藥時(shí)間為48天；②分別在給藥前和給藥后第15天、30天、45天時(shí)用尿蛋白試紙對(duì)各組小鼠進(jìn)行尿蛋白半定量測(cè)定；③在給藥第45天時(shí)，所有小鼠眼球內(nèi)眥靜脈處毛細(xì)管采血200μl，離心分離血清，用間接免疫熒光法測(cè)定ANA滴度；④用流式細(xì)胞術(shù)分別測(cè)定外周血及脾中CD4+CCR3+CD95+細(xì)胞數(shù)⑤將各組小鼠摘眼球放血處死后立即解剖脾臟及胸腺并稱(chēng)量它們的濕重，計(jì)算脾指數(shù)和胸

3、腺指數(shù)，解剖出腎臟并立即放入福爾馬林溶液中固定，進(jìn)行組織病理檢查。結(jié)果：①與狼瘡鼠對(duì)照組相比，強(qiáng)的松組和LCF-2組均可明顯降低尿蛋白含量（P均<0.05），而治療組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.823>0.05），中藥LCF-2的藥效與強(qiáng)的松的差別無(wú)顯著性；②ANA滴度的測(cè)定結(jié)果顯示:治療組的ANA滴度對(duì)數(shù)的數(shù)值（分別為強(qiáng)的松組1.33±0.76，LCF-2組1.44±0.84）均顯著低于狼瘡鼠對(duì)照組(2.3±0.46)，治療組之間相

4、比較差異無(wú)顯著性（P=0.81>0.05），對(duì)于BXSB狼瘡鼠的治療效果相近；③對(duì)各組小鼠的脾指數(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：狼瘡鼠對(duì)照組的脾指數(shù)為0.005517±0.00096，C57BL/6對(duì)照組的脾指數(shù)為0.00265±0.00078，前者明顯高于后者（P=0.005<0.01），狼瘡鼠對(duì)照組的脾臟比C57BL/6對(duì)照組的脾臟明顯增生。LCF-2組脾指數(shù)為0.005467±0.00134，強(qiáng)的松組脾指數(shù)為0.005883±0.002553，兩

5、組與狼瘡鼠對(duì)照組相比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，強(qiáng)的松、LCF-2治療組均沒(méi)有抑制脾增生的作用；④各組小鼠的胸腺指數(shù)分析結(jié)果顯示：狼瘡鼠對(duì)照組的胸腺指數(shù)是0.0014±0.00559，C57BL/6對(duì)照組的胸腺指數(shù)是0.00247±0.00356，前者顯著低于后者（P=0.0003<0.01），提示狼瘡鼠對(duì)照組的胸腺較C57BL/6對(duì)照組的胸腺萎縮明顯。LCF-2組的胸腺指數(shù)是0.00197±0.00258，強(qiáng)的松組的胸腺指數(shù)是0.0012±0

6、.0055，狼瘡鼠對(duì)照組的胸腺指數(shù)是0.0014±0.00559，LCF-2組顯著高于狼瘡鼠對(duì)照組（P=0.036<0.05）。強(qiáng)的松組低于狼瘡鼠對(duì)照（P=0.031<0.05），提示LCF-2有抑制狼瘡鼠胸腺萎縮的作用，強(qiáng)的松則下調(diào)胸腺指數(shù)，能進(jìn)一步增加胸腺的萎縮；⑤流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定外周血細(xì)胞的CD4+CCR3+CD95+結(jié)果顯示：狼瘡鼠對(duì)照組的CD4+CCR3+值為38.05±4.98，C57BL/6對(duì)照組的CD4+CCR3+值為30

7、.79±4.57，前者高于后者（P=0.032<0.05）；LCF-2組的CD4+CCR3+值為31.23±5.66，強(qiáng)的松組的CD4+CCR3+值為29.04±6.44，其結(jié)果顯示兩治療組均比狼瘡鼠對(duì)照組低（P值均小于0.05），兩治療組CD4+CCR3+值與C57BL/6對(duì)照組相比P值均大于0.05（分別是0.584和0.89），提示中西藥治療后的CD4+CCR3+值均接近正常；CD4+CCR3+CD95+的測(cè)定結(jié)果數(shù)值多數(shù)為0，表

8、明此次實(shí)驗(yàn)所有小鼠血細(xì)胞中存在的凋亡現(xiàn)象均不明顯；⑥流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定脾CD4+CCR3+CD95+結(jié)果顯示：狼瘡鼠對(duì)照組的脾CD4+CCR3+值為32.0±3.0，C57BL/6對(duì)照組的CD4+CCR3+值為20.72±3.03，前者顯著高于后者（P=0.002<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LCF-2組CD4+CCR3+值為14.78±9.7，強(qiáng)的松組CD4+CCR3+值為20.69±3.88，二者均比狼瘡鼠對(duì)照組的CD4+CCR3+值

9、明顯降低（P值分別為0.0003和0.002，均小于0.01），其中LCF-2組下降得尤為顯著；兩治療組相比差異無(wú)顯著性（P=0.085>0.05），提示兩治療組下調(diào)CD4+CCR3+的作用差異不大；狼瘡鼠對(duì)照組的CD4+CCR3+CD95+值為0.43±0.20，C57BL/6對(duì)照組的CD4+CCR3+CD95+值為0.18±0.15，前者顯著高于后者（P<0.05）；強(qiáng)的松組的CD4+CCR3+CD95+值為0.65 ±0.17，狼

10、瘡鼠對(duì)照組CD4+CCR3+CD95+值為0.43±0.20，前者高于后者（P=0.032<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而LCF-2組的CD4+CCR3+CD95+值為0.27±0.19，與狼瘡鼠對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性（P=0.099）。結(jié)論：①BXSB狼瘡鼠符合Th2細(xì)胞優(yōu)勢(shì)學(xué)說(shuō)，并且CCR3作為T(mén)h2細(xì)胞表面標(biāo)志可以反映Th2細(xì)胞的增減變化。中藥狼瘡方2號(hào)與西藥強(qiáng)的松均可以降低Th2細(xì)胞的比例；②BXSB狼瘡鼠Th2細(xì)胞存在著凋亡

11、的增加。狼瘡方2號(hào)沒(méi)有明顯的促進(jìn)凋亡或抑制凋亡的作用，而強(qiáng)的松則可以使得Th2細(xì)胞的凋亡進(jìn)一步增強(qiáng)，促發(fā)凋亡的作用比較明顯。強(qiáng)的松可能是通過(guò)促進(jìn)Th2細(xì)胞的凋亡來(lái)使Th2細(xì)胞比例有所降低，糾正Th1/Th2比例失衡，從而起到治療目的。而LCF-2促進(jìn)凋亡的作用不明顯，可能是通過(guò)其他途徑糾正Th1/Th2比例失衡的；③中西藥治療的最終效果相近。而中藥LCF-2又能抑制狼瘡鼠的胸腺萎縮，減少用藥帶來(lái)的副反應(yīng)，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究；④BX