梔子甙通過(guò)抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥因子的分泌增加星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、目的：旨在通過(guò)胚胎中腦前體細(xì)胞體外培養(yǎng)獲得高純度的多巴胺能神經(jīng)元純神經(jīng)元培養(yǎng)體系，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 方法：取E12鼠胚中腦腹側(cè)的中腦前體細(xì)胞，在添加堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的DMEM/F12/N2/L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽培養(yǎng)液中進(jìn)行擴(kuò)增，5d后停用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)細(xì)胞分化，4d后通過(guò)Neurobasal/阿糖胞苷抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)，獲得純神經(jīng)元，使用TH鑒定多巴胺能神經(jīng)元，計(jì)數(shù)細(xì)胞比例和純度，利用β-tu

2、bulin III鑒定神經(jīng)元，并計(jì)數(shù)細(xì)胞比例和純度。 結(jié)果：在添加了堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子20ug/L的DMEM/F12/N2/L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽培養(yǎng)液中，中腦前體細(xì)胞增殖良好，體外培養(yǎng)7d后細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增到培養(yǎng)前的(16.54±1.25)倍。使用Neurobasal/阿糖胞苷后膠質(zhì)細(xì)胞受到抑制，神經(jīng)元占94％以上，其中多巴胺能神經(jīng)元的比例可達(dá)(35.5±4.13)％。 結(jié)論：E12鼠胚中腦前體細(xì)胞原代培養(yǎng)，

3、聯(lián)合使用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子/L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽和阿糖胞苷/Neurobasal是建立高純度多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)體系的可靠途徑。 第二部分 目的：研究梔子甙在脂多糖介導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞激活對(duì)多巴胺能神經(jīng)元存活影響中的作用及可能機(jī)制。 方法：分別建立高純度多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)體系、多巴胺能神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系，予以梔子甙預(yù)處理后再加入脂多糖作用24h，觀察多巴胺能神經(jīng)元的生存率、TH mRNA

4、的表達(dá)及培養(yǎng)基中TNF-α、NO、IL-6、MMP-9和GDNF含量的變化。 結(jié)果：星形膠質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)多巴胺能神經(jīng)元的存活，梔子甙不能增加高純度多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)體系中多巴胺能神經(jīng)元的存活率，卻可增加混合培養(yǎng)體系中多巴胺能神經(jīng)元存活率達(dá)57％。脂多糖作用24h后混合培養(yǎng)體系中TNF-α、NO、GDNF含量并無(wú)顯著變化，IL-6、MMP-9含量顯著上升，梔子甙可明顯下調(diào)這種反應(yīng)。 結(jié)論：脂多糖通過(guò)過(guò)度激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞而增加