抑制性寡脫氧核苷酸對(duì)染矽塵小鼠早期炎癥的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、矽肺是因長(zhǎng)期大量吸入游離二氧化硅(SiO2)粉塵所引起的以肺組織彌漫性纖維化為主要特征的全身性疾病。根據(jù)2011年4月18日衛(wèi)生部向社會(huì)公布的《2010年職業(yè)病防治工作情況和2011年重點(diǎn)工作》，2010年新發(fā)職業(yè)病27240例，其中塵肺病23812例。目前塵肺病仍是我國(guó)最嚴(yán)重的職業(yè)病，2010年報(bào)告的塵肺病例數(shù)占職業(yè)病報(bào)告總例數(shù)的87.42％。有專家調(diào)查發(fā)現(xiàn)，能夠做職業(yè)病診斷并在疾控中心登記的，僅為塵肺病患者的10％-20％，因此估計(jì)

2、塵肺病實(shí)際發(fā)生的病例數(shù)不少于100萬人。因此，進(jìn)一步探討矽肺的發(fā)病機(jī)制和尋找新型的治療藥物對(duì)矽肺的預(yù)防、治療乃至最終消除矽肺具有重要的意義。目前的研究表明，T淋巴細(xì)胞由樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞處理修飾二氧化硅后激活。雖然Th1/Th2極化在矽肺的發(fā)病機(jī)制中仍不完全明確，但研究表明，Th1型細(xì)胞因子在矽肺的炎癥階段起主要作用，而Th2型細(xì)胞因子在矽肺的纖維化階段起主要作用。IFN-γ(γ-干擾素，Interferon-γ)具有促

3、進(jìn)初始T淋巴細(xì)胞向Th1型細(xì)胞分化以及活化巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞的作用，是典型的Th1型細(xì)胞因子。Th1型細(xì)胞的分化成熟需要IFN-γ依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子1(STAT1)STAT1和STAT4的磷酸化信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，富含重復(fù)“TTAGGG”基序的抑制性寡核苷酸(Sup ODN)具有下調(diào)Th1型細(xì)胞因子和前炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的作用。因此，可以將這類ODN用于矽肺的研究中，觀察其對(duì)矽肺早期炎癥的影響，以及炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生影響。<

4、br>　　 研究目的:觀察Sup ODN對(duì)染矽塵小鼠早期炎癥的影響，探討Sup ODN作用機(jī)制并評(píng)價(jià)其應(yīng)用價(jià)值。
　　 研究方法:雌性Balb/c小鼠60只隨機(jī)分4組，分別為空白對(duì)照組、矽塵組、Sup ODN組、對(duì)照寡核苷酸(Con ODN)組。除空白對(duì)照組氣管注入0.1mL生理鹽水外，其余各組采用氣管暴露法一次性注入0.1mL SiO2懸液(5g/L)，Sup ODN組和Con ODN組在造模前3h分別腹腔注射Sup ODN

5、、Con ODN各0.3mL(1 mg/mL)。以建模術(shù)時(shí)為0d記，模型建立7d后處死動(dòng)物，采用瑞氏染色作血清白細(xì)胞分類計(jì)數(shù);ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ和TNF-α水平;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織中IFN-γ和pSTAT4的表達(dá)，并作定量分析;HE染色觀察肺組織病理變化;天狼猩紅染色觀察肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.HE染色證實(shí)氣管暴露注入二氧化硅粉塵懸液成功建立了小鼠矽肺模型。
　　

6、2.Sup ODN組與矽塵組、Con ODN組相比，血清中IFN-γ表達(dá)明顯降低;矽塵組小鼠肺組織間隔水腫并增厚，Sup ODN組小鼠肺組織炎癥較矽塵組減輕;與空白對(duì)照組比較，矽塵組小鼠肺組織中IFN-γ表達(dá)增加，與矽塵組比較，Sup ODN組小鼠肺組織內(nèi)IFN-γ表達(dá)減少;與空白對(duì)照組比較，矽塵組小鼠肺組織中pSTAT4表達(dá)顯著增加，與矽塵組比較，Sup ODN組小鼠肺組織內(nèi)pSTAT4表達(dá)顯著減少。
　　 研究結(jié)論: