人類(lèi)軟骨糖蛋白-39對(duì)關(guān)節(jié)軟骨祖母細(xì)胞增殖影響的研究.pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(OA)是臨床一種常見(jiàn)的多發(fā)生于老年人群的關(guān)節(jié)退行性疾病。人類(lèi)軟骨糖蛋白-39(HC gp-39)作為軟骨自身分泌的細(xì)胞因子,對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖與分化的作用如何,目前尚缺乏統(tǒng)一定論。本研究對(duì)人體的軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)、分離,觀察HC gp-39對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞及祖母細(xì)胞增殖的影響。
　　方法:采用流式分選的方法所得的軟骨祖母細(xì)胞,進(jìn)行表型鑒定,流式分選,確定軟骨祖細(xì)胞(CD105+、CD166+)的百分率后,將細(xì)胞

2、接種于96孔板,對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)大傳代培養(yǎng),待細(xì)胞充分貼壁后,加入HCgp-39,濃度分別為0,25,50,100,500ng/ml。每種濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔,分別培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后,收集各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0h、24h、48h、72h)的細(xì)胞,加入10μl的MTS檢測(cè)液,孵育4小時(shí)后二甲亞砜(DMSO)終止反應(yīng),酶標(biāo)儀570nm波長(zhǎng)檢測(cè)各孔光的吸收值(OD值),按公式增殖率=其他時(shí)間點(diǎn)OD值÷0小時(shí)OD值×100％(同一樣品)計(jì)算細(xì)胞的增值率并進(jìn)

3、行比較。
　　結(jié)果:關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中能夠分離提取表達(dá)CD205/CD166的細(xì)胞,即軟骨祖母細(xì)胞;在發(fā)生OA的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中分離提取的軟骨祖母細(xì)胞細(xì)胞增殖速度快于正常組;在正常軟骨祖母細(xì)胞中加入HC gp-39時(shí),祖母細(xì)胞的增殖率隨加入的濃度增高而不斷降低;而對(duì)于OA軟骨祖母細(xì)胞,加入HC gp-39后,祖母細(xì)胞的增殖率明顯增高,且具有時(shí)間濃度依賴(lài)效應(yīng)。
　　結(jié)論:在成人的關(guān)節(jié)軟骨中存在軟骨祖母細(xì)胞;發(fā)生OA時(shí)關(guān)節(jié)周?chē)膬?nèi)環(huán)境