應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)不同來源淋巴瘤細(xì)胞株及正常淋巴細(xì)胞的差異蛋白表達(dá).pdf

1、目的：淋巴瘤是血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，診斷上以組織活檢作為確診標(biāo)準(zhǔn)，而淋巴瘤早期小病灶或位于體內(nèi)的深部病灶組織活檢檢出率較低，給臨床診斷帶來困難。目前其基本治療策略是以化療為主的化、放療結(jié)合的綜合治療。我們應(yīng)用SELDI—TOF—MS技術(shù)對(duì)體外培養(yǎng)的人T、B淋巴瘤細(xì)胞株和正常淋巴細(xì)胞的蛋白進(jìn)行檢測(cè)，通過Proteinchip software收集數(shù)據(jù)，并應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以尋找淋巴瘤

2、細(xì)胞和正常淋巴細(xì)胞的差異蛋白及不同來源淋巴瘤細(xì)胞間的差異蛋白。體外培養(yǎng)的細(xì)胞株雖然不能完全反映體內(nèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和生物學(xué)活性，但它具有成分單一、均質(zhì)性好、實(shí)驗(yàn)條件容易控制等優(yōu)點(diǎn)，通過實(shí)驗(yàn)期望為尋找淋巴瘤的分子標(biāo)志物并進(jìn)而為研究淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制和尋找治療靶位打下初步基礎(chǔ)，并為其早期診斷提供幫助。 方法：常規(guī)培養(yǎng)人T、B淋巴瘤細(xì)胞株于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基的25ml培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱

3、中培養(yǎng)，每3～5天傳代一次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)，將兩種細(xì)胞分別接種于6孔培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)，于接種2、4、6天后分別收集細(xì)胞，每個(gè)時(shí)間段設(shè)3個(gè)復(fù)孔，并使用淋巴細(xì)胞分離液從正常人外周血中分離出淋巴細(xì)胞接種子6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中另加入100ug/ml的植物血凝素，同樣于接種2、4、6天后分別收集細(xì)胞，每個(gè)時(shí)間段設(shè)3個(gè)復(fù)孔，使用蛋白提取液分別提取各孔細(xì)胞的總蛋白，并在收集細(xì)胞前各取少許淋巴

4、瘤細(xì)胞培養(yǎng)液上質(zhì)譜檢測(cè)，應(yīng)用表面增強(qiáng)激光解吸—離子化—飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，用CM10芯片獲得蛋白表達(dá)指紋圖譜，并通過Proteinchip software收集數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，得到的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行初步的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（計(jì)算均值X、標(biāo)準(zhǔn)差S和P值），P<0．05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1．T淋巴瘤細(xì)胞株與正常淋巴細(xì)胞比較有6個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)荷比峰（P<0．05），有5個(gè)蛋白質(zhì)峰在T淋巴瘤細(xì)胞株

5、中高表達(dá)，1個(gè)蛋白質(zhì)峰低表達(dá)。2．B淋巴瘤細(xì)胞株與正常淋巴細(xì)胞比較有6個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)荷比峰（P<0．05），有4個(gè)蛋白質(zhì)峰在B淋巴瘤細(xì)胞株中高表達(dá)，2個(gè)蛋白質(zhì)峰低表達(dá)。3．T淋巴瘤細(xì)胞株和B淋巴瘤細(xì)胞株有共同的相對(duì)于正常淋巴細(xì)胞高表達(dá)和低表達(dá)的蛋白質(zhì)荷比峰。4．不同培養(yǎng)時(shí)間T淋巴瘤細(xì)胞株的蛋白表達(dá)無顯著差異（培養(yǎng)時(shí)間較短時(shí)）。5．不同培養(yǎng)時(shí)間B淋巴瘤細(xì)胞株的蛋白表達(dá)無顯著差異（培養(yǎng)時(shí)間較短時(shí)）。6．T淋巴瘤細(xì)胞株與B淋巴瘤細(xì)胞株比較有

6、7個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)荷比峰（P<0．05），相對(duì)于B淋巴瘤細(xì)胞株而言，有3個(gè)蛋白質(zhì)峰在T淋巴瘤細(xì)胞株中高表達(dá)，4個(gè)蛋白質(zhì)峰低表達(dá)。 結(jié)論：1．T、B淋巴瘤細(xì)胞與正常淋巴細(xì)胞比較蛋白質(zhì)組學(xué)水平均有顯著差異。 2．T、B淋巴瘤細(xì)胞間的蛋白質(zhì)組學(xué)水平有顯著差異。 3．同種的淋巴瘤細(xì)胞株在不同培養(yǎng)時(shí)間的蛋白質(zhì)組學(xué)水平無顯著差異（培養(yǎng)時(shí)間較短時(shí)）。 4．應(yīng)用SELDI—TOF—MS技術(shù)可能對(duì)篩選淋巴瘤的分子標(biāo)志物有重