烏拉爾甘草內(nèi)生菌的分離、典型菌種的生物學(xué)功能及抗逆特性的研究.pdf

1、目的：對烏拉爾甘草內(nèi)生菌分離、純化；初步篩選出對病原菌有拮抗效果的菌種作為典型菌種，進(jìn)一步對典型菌種進(jìn)行生物學(xué)功能研究以篩選出生物學(xué)功能多樣的菌種作為目標(biāo)菌種；最后，考察目標(biāo)菌種對鹽脅迫和干旱脅迫下甘草種子萌發(fā)和幼苗生長的影響效應(yīng)及其生理生化機(jī)制，本研究不僅為內(nèi)生菌資源的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)，同時也為通過接種內(nèi)生菌來提高逆境脅迫下甘草的生長提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：采用組織塊分離法，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基中分離、純化

2、內(nèi)生細(xì)菌和真菌，內(nèi)生細(xì)菌和真菌分別于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5d和5-7d；采用濾紙片法，通過觀察有無抑菌圈及抑菌圈的大小來檢測內(nèi)生菌對病原菌的拮抗效果；通過觀察內(nèi)生菌在不同磷源、碳源、氮源培養(yǎng)基中的生長狀況來檢測內(nèi)生菌對營養(yǎng)元素的利用能力；通過觀察內(nèi)生菌在不同pH和不同NaCl濃度的培養(yǎng)基環(huán)境中的生長狀況，來檢測內(nèi)生菌的耐受能力；以16S rDNA測序，對比核糖體數(shù)據(jù)庫鑒定典型菌種；最后采用培養(yǎng)皿紙上發(fā)芽法和發(fā)芽盒沙培法考察目標(biāo)菌種

3、對鹽脅迫和干旱脅迫下甘草種子萌發(fā)、幼苗生長和生理生化指標(biāo)的影響效應(yīng)。
　　結(jié)果：通過組織塊分離法在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中分離出內(nèi)生細(xì)菌100株，其中根占76％、莖占15%、葉占9%；從PDA培養(yǎng)基中分離出內(nèi)生真菌19株，其中根占42.11%、莖占36.84%、葉占21.05%；通過濾紙片法初步篩選出對西瓜枯萎病菌、小麥根腐病菌、黃花枯萎病菌、煙草赤星病菌、棉花枯萎病菌等病原菌綜合抑制效果較好的菌種8種，分別編號為G2、G3、G5、G

4、8、G9、G15、Y1和Y2，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對這8種菌種的溶磷、碳源和氮源利用以及耐鹽、酸堿等生物學(xué)特性進(jìn)行系統(tǒng)研究，篩選出綜合性能較好的菌種2種，分別為G2（地衣芽孢桿菌）和G5（短小芽孢桿菌）。最后，通過種子萌發(fā)和幼苗生長實驗研究發(fā)現(xiàn)，菌種G2、G5可以緩解鹽脅迫和干旱脅迫下對種子萌發(fā)的抑制，菌株G2可以緩解鹽脅迫對甘草幼苗根和莖生長的抑制；菌種G2、G5可以緩解鹽脅迫所造成的甘草體內(nèi)自由氧增多，同時在干旱脅迫下可以通過提高抗氧

5、化酶活性來促進(jìn)甘草幼苗清除過多的自由氧；菌種G2和G5在鹽脅迫下可以通過提高脯氨酸含量促進(jìn)甘草幼苗對滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的調(diào)節(jié)，菌種G5可以在干旱脅迫下可以通過提高脯氨酸含量促進(jìn)甘草幼苗對滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的調(diào)節(jié)；菌種G2和G5在鹽脅迫下可以明顯降低MDA含量，降低鹽毒害，在干旱脅迫初期降低MDA含量，降低初期干旱毒害。
　　結(jié)論：烏拉爾甘草中含有豐富的內(nèi)生菌，其中能夠?qū)Σ≡修卓剐Ч覍I養(yǎng)元素高效利用的菌種能夠起到緩解甘草鹽脅迫和干旱脅迫