參附對(duì)缺血再灌注腸上皮細(xì)胞凋亡的抑制作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:研究參附對(duì)大鼠缺血再灌注期間腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡的影響,并探討其分子作用機(jī)制.方法:24只健康SD大鼠,體重250±25g,雌雄不限.隨機(jī)分為假手術(shù)組(C組)、缺血再灌注組(I/R組)和SF治療組(SF組).I/R組和SF組用無損傷血管鉗阻斷腸系膜上動(dòng)脈血流60min,再灌注120min,取完組織后活殺大鼠.C組不阻斷腸系膜上動(dòng)脈血流,余同實(shí)驗(yàn)組.SF組于阻斷前30min經(jīng)靜脈輸注參附注射液2ml/100g.C組和I/R組于阻斷前3

2、0min分別經(jīng)靜脈輸注生理鹽水2ml/100g.整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均面罩給氧(FiO2=33﹪),活殺前每只大鼠取3cm回腸用多聚甲醛液固定24h,常規(guī)制備回腸全層組織石蠟切片.分別用免疫組化SP法檢測(cè)Caspase-3、Fas、Bcl-2的表達(dá),用原位末端標(biāo)記TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡數(shù)、ELISA法檢測(cè)腸組織勻漿中TNF-α的含量.用HPIAS-1000醫(yī)學(xué)彩色圖象分析系統(tǒng)測(cè)定凋亡指數(shù)及Caspase-3、Fas、Bcl-2的光密度值(O

3、D).小腸粘膜病理形態(tài)學(xué)變化采用Haglund小腸組織損傷分級(jí)法評(píng)定.結(jié)論:腸缺血60min、再灌注120min可引起腸粘膜上皮細(xì)胞異常凋亡.TNF-α-Fas/Fas-L-Caspase-3—凋亡的途徑可能是腸缺血/再灌注期間腸粘膜上皮細(xì)胞異常凋亡的重要機(jī)制.參附注射液可通過抑制TNF-α的產(chǎn)生或釋放,上調(diào)抑凋亡基因Bcl-2的表達(dá),下調(diào)促凋亡基因Fas及Caspase-3的表達(dá),從而抑制缺血再灌注期間腸粘膜上皮細(xì)胞的異常凋亡,進(jìn)而減