恒河猴凝血功能及部分基因分子遺傳比較研究.pdf

1、目的：恒河猴是凝血藥物和同種、異種移植臨床前研究中最重要的動物模型，為了探索和評價新的凝血藥物的作用效果，提供豬到猴異種移植后凝血紊亂的病因機制和防治策略，預(yù)測豬到人的異種移植的可能凝血結(jié)果，我們初步研究了恒河猴的凝血系統(tǒng)。 方法：采用TEG檢測恒河猴的凝血和纖溶功能的整體概況；采用凝集試驗測定PT、APTT，一期法測定CFⅡ、CFⅦ、CFX的活性，底物顯色法測定ATⅢ的活性；全自動血細(xì)胞儀計數(shù)PLT；RT-PCR法檢測恒河猴、

2、豬和人肝組織CFⅡ、CFⅦ、CFX和ATⅢ mRNA的表達并使用Totallab 2.0軟件定量分析；以上數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析并比較猴、人和豬之間的差異：使用λZAP Express為載體構(gòu)建恒河猴肝臟cDNA表達文庫，用PCR法進行文庫篩選，結(jié)合RACE技術(shù)獲得恒河猴CFⅡ、CFⅦ、CFX和 ATⅢ全長cDNA序列，利用生物信息學(xué)方法推測其氨基酸序列，并與人、豬進行比較。用SWISS-MODEL程序模擬創(chuàng)建凝血

3、酶原蛋白的三維結(jié)構(gòu)并比較其在重要的大分子相互作用位點上與人、豬凝血酶原的差異。 結(jié)果：TEG 檢測顯示猴的凝血功能比人的強、纖溶功能卻較人的弱(P<0.05)；猴的PT比人的長(P<0.05)，APTT則短于豬而長于人(P<0.05)。猴的CFⅡ、CFⅦ活性較豬和人的強(P<0.05)，而CFX、ATⅢ活性較豬和人的弱(P<0.05)；猴的PLT數(shù)量較人的高(P<0.05)；猴肝CFⅡ、CFX、ATⅢ的mRNA表達量較豬的低(P

4、<0.05)，CFⅦ的mRNA表達量較人和豬的低(P<0.05)；首次獲得了恒河猴四個凝血相關(guān)基因的全長cDNA序列。猴與人、豬四個凝血基因比較均顯示了差異，差異最大和最小的分別為CFⅦ和 ATⅢ。凝血酶原cDNA全長序列推導(dǎo)出的蛋白質(zhì)序列含有1個信號肽、1個前導(dǎo)肽、1個Gla結(jié)構(gòu)域、2個Kringle結(jié)構(gòu)域和1個Trypsin結(jié)構(gòu)域。恒河候凝血酶原基因與人、豬的比較發(fā)現(xiàn)，在一些重要結(jié)合位點上存在差異。 結(jié)論：以上結(jié)果顯示了猴與