烏司他丁對(duì)大鼠急性肺損傷肺組織NF-κB表達(dá)的影響及其肺保護(hù)作用.pdf

1、背景： 急性肺損傷(ALI)是現(xiàn)代危重病醫(yī)學(xué)的一大難題，若不能得到及時(shí)有效的治療，往往會(huì)發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)，嚴(yán)重危及患者生命，并耗費(fèi)大量的醫(yī)療資源。ALI通常繼發(fā)于嚴(yán)重感染、膿毒癥、戰(zhàn)傷、多發(fā)傷、誤吸、大量輸血、缺血再灌注損傷等臨床常見的急危重病癥，是一種臨床常見病、多發(fā)病。各種致病因素引起以多形核中性粒細(xì)胞(PMN)為主的炎性細(xì)胞在肺微血管大量積聚、浸潤，過度表達(dá)和釋放大量炎癥介質(zhì)，如TNF-α、IL-6、I

2、L-8、ICAM-1、氧自由基等，使肺泡膜受損，通透性增加而導(dǎo)致ALI的發(fā)生。NF-κB在調(diào)控多種參與ALI的炎癥介質(zhì)的基因表達(dá)上起著重要作用，NF-κB活化與ALI的發(fā)生有密切關(guān)系，國內(nèi)外的許多基礎(chǔ)和臨床研究業(yè)已證明了這一點(diǎn)。如何有效抑制NF-κB活化，避免炎癥反應(yīng)“級(jí)聯(lián)放大”，從而引發(fā)ALI甚至ARDS，是一個(gè)尚未解決的難題。盡管目前臨床上有各種各樣的治療手段，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也在進(jìn)行各種新的治療方法的研究，但仍未有突破性進(jìn)展。理想的有效治

3、療似乎應(yīng)圍繞抑制NF-κB活化和抑制。PMN積聚、浸潤和損傷肺血管內(nèi)皮細(xì)胞這兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)展開。 烏司他丁(UTI)是一種廣譜蛋白酶抑制劑，能抑制多種蛋白、糖和脂類水解酶的活性，減少炎性介質(zhì)的過度釋放，改善微循環(huán)和組織灌注。烏司他丁對(duì)ALI時(shí)肺組織TNF-a和MPO的升高有抑制作用，能明顯改善肺泡膜炎性細(xì)胞浸潤、水腫及出血癥狀。在發(fā)生ALI后，早期抑制NF-κB活性可減輕肺損傷。烏司他丁是否通過抑制NF-κB活化，從而抑制炎癥介質(zhì)過

4、度釋放和PMN浸潤，發(fā)揮肺保護(hù)作用，目前還不清楚。為此我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)，以期明確烏司他丁治療ALI的分子生物學(xué)機(jī)制，為臨床治療性應(yīng)用提供理論依據(jù)。 研究內(nèi)毒素誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷時(shí)，烏司他丁對(duì)肺組織NF-κB活性、TNF-α蛋白表達(dá)的影響，對(duì)肺組織髓過氧化物酶和丙二醛活性的影響，以及對(duì)肺泡毛細(xì)血管基膜通透性的影響，探討烏司他丁對(duì)ALI的治療效果及其作用機(jī)制。 方法： 1.選取健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量180～2

5、00g，隨機(jī)分為3組：健康對(duì)照組12只(NC組)，肺損傷組12只(LPS組)，烏司他丁治療組12只(UTI組)。依文獻(xiàn)復(fù)制大鼠ALI模型：3％戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉后，股靜脈緩慢注射LPS 5 mg/kg。治療組在注射完LPS后，繼續(xù)由股靜脈注入烏司他丁50,000u/kg，對(duì)照組注入等量生理鹽水。各組分別于注射后2h、4h經(jīng)頸動(dòng)脈放血處死6只動(dòng)物，取出肺組織進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。 2.通過測定PaO<,2>、肺組織濕

6、/干質(zhì)量比值、HE染色下肺組織病理檢查結(jié)果，評(píng)價(jià)肺損傷的程度和烏司他丁的治療效果。 3.分光光度比色法測定肺組織勻漿中MPO、MDA的含量；ELISA法測定肺組織TNF-a蛋白含量；免疫組化法測定肺組織NF-κB的表達(dá)。 結(jié)果： 1.與空白對(duì)照組比較，內(nèi)毒素?fù)p傷組出現(xiàn)了明顯的肺損傷：PaO<,2>明顯下降(97.46±6.16mmHg vs 135.80±5.30mmHg，P<0.01)、肺組織濕/干質(zhì)量比值明顯

7、增高(5.46±0.37 vs 4.48±0.20，P<0.01)，HE染色下肺組織病理檢查結(jié)果顯示肺組織小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡間隔明顯增厚，間質(zhì)明顯水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤，大量肺泡萎陷不張或呈肺氣腫樣改變，肺泡腔可見明顯出血、滲出；烏司他丁治療組也存在PaO<,2>下降、肺組織濕/干質(zhì)量比值增高和間質(zhì)水腫、滲出，但程度較損傷組輕。 2.肺組織勻漿中的MPO、MDA含量測定結(jié)果顯示，內(nèi)毒素?fù)p傷組MPO、MDA 含量較空白對(duì)照組明顯升

8、高(P<0.01)，烏司他丁治療組MPO、MDA含量較損傷組低(P<0.05)，但仍明顯高于空白對(duì)照組(P<0.01)。 3.內(nèi)毒素?fù)p傷組的 TNF-α蛋白含量、NF-κB表達(dá)量最高，烏司他丁治療組其次，空白對(duì)照組僅有少量表達(dá)。NF-κB的表達(dá)在2h最高，在4h仍處于較高的水平，TNF-α含量也呈現(xiàn)相似的變化。 結(jié)論： 1.內(nèi)毒素誘發(fā)大鼠ALI時(shí)，肺組織遭受了明顯的損傷，PaO<,2>明顯下降、肺組織濕/干質(zhì)量比

9、值明顯增高，肺泡膜遭到破壞，間質(zhì)明顯水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤、滲出，TNF-a蛋白含量、NF-κB表達(dá)量均出現(xiàn)了明顯升高。 2.烏司他丁能減輕ALI時(shí)肺組織的損傷程度，可維持較高的動(dòng)脈血氧分壓，并能在一定程度上抑制PMN活化，減少PMN在肺部積聚、浸潤、滲出，減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成，起到比較明確的肺保護(hù)作用。 3.烏司他丁能有效減少ALI時(shí)肺組織TNF-a蛋白含量和NF-κB的表達(dá)量，通過抑制NF-κB的活化和炎性細(xì)胞因