大黃黃連瀉心湯化學(xué)成分分析與藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、大黃黃連瀉心湯是《傷寒論》中收錄的治療“心下痞”證的著名方劑，后世對(duì)其組方中除大黃和黃連外是否還配伍有黃芩一直存在爭(zhēng)議，嚴(yán)重制約了對(duì)該復(fù)方進(jìn)一步的繼承和發(fā)揚(yáng)。本研究擬以化學(xué)成分的變化為主線，系統(tǒng)研究該復(fù)方配伍黃芩前后的化學(xué)成分及其溶出變化規(guī)律；在此基礎(chǔ)上，研究復(fù)方的不同配伍中主要化學(xué)成分小檗堿在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，為揭示大黃黃連瀉心湯組方本相提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考。
　　 一、大黃在煎煮與浸漬過(guò)程中蒽醌類成分的含量變化比較研究

2、>　　 為了比較大黃黃連瀉心湯浸漬法與傳統(tǒng)湯劑煎煮法的區(qū)別，本研究采用HPLC法測(cè)定并比較復(fù)方中君藥大黃在不同處理方法(浸漬法和煎煮法)和在不同時(shí)間點(diǎn)的湯劑中游離蒽醌、結(jié)合蒽醌和總蒽醌的含量。結(jié)果表明，本研究所建立的HPLC方法可很好的用于大黃中蒽醌類成分的分析；大黃經(jīng)煎煮法處理后湯劑中游離蒽醌和結(jié)合蒽醌的溶出量比經(jīng)浸漬法處理的樣品含量明顯要高；游離蒽醌類成分在兩種處理方法中的溶出率隨時(shí)間變化基本穩(wěn)定，結(jié)合蒽醌類成分在煎煮和浸漬過(guò)程中

3、有所下降。本研究表明，采用浸漬法的大黃中的蒽醌類成分明顯比煎煮法的低，這可能導(dǎo)致復(fù)方瀉下的作用減弱。
　　 二、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中蒽醌類成分的變化研究
　　 大黃黃連瀉心湯組方中除大黃和黃連外，是否還應(yīng)配伍有黃芩始終是爭(zhēng)議的焦點(diǎn)，本研究以復(fù)方中君藥大黃所含的蒽醌類成分為研究對(duì)象，分析該復(fù)方有無(wú)配伍黃芩對(duì)蒽醌類成分的影響。結(jié)果表明，本研究建立的HPLC方法可用于大黃黃連瀉心湯復(fù)方配伍黃芩時(shí)蒽醌類成分的分析；大黃

4、與黃連或黃芩配伍時(shí)蒽醌類成分變化明顯，有無(wú)配伍黃芩對(duì)蒽醌類成分含量有顯著影響。
　　 三、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中主要化學(xué)成分的變化研究
　　 為了全面分析大黃黃連瀉心湯有無(wú)配伍黃芩時(shí)對(duì)浸漬劑中主要化學(xué)成分的影響，本研究采用HPLC-UV法，以乙腈-0.5％三乙胺(磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5)為流動(dòng)相，Luna苯基柱為色譜柱，建立了同時(shí)測(cè)定復(fù)方中大黃蒽醌類成分、黃連生物堿成分和黃芩黃酮類成分的共9個(gè)主要化學(xué)成分的方法，并

5、分析了該復(fù)方在配伍黃芩前后浸漬劑中這些成分的變化。結(jié)果表明，本研究建立的方法可用于該復(fù)方中9個(gè)主要成分的分析；大黃黃連瀉心湯配伍黃芩后浸漬劑中大黃蒽醌類成分明顯增加，黃連生物堿中小檗堿含量明顯減少；配伍黃芩將對(duì)該復(fù)方中的主要化學(xué)成分含量產(chǎn)生明顯影響。
　　 四、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中主要化學(xué)成分的歸屬與鑒定
　　 為了進(jìn)一步研究復(fù)方配伍黃芩后是否有新化合物產(chǎn)生，并對(duì)復(fù)方中的主要化學(xué)成分進(jìn)行歸屬和鑒定，本研究建立了

6、大黃黃連瀉心湯中主要化學(xué)成分的HPLC-DAD分析方法，對(duì)該復(fù)方中各藥味的浸漬劑和不同藥味配伍浸漬劑中的化學(xué)成分，通過(guò)比較各色譜峰與對(duì)照品的保留時(shí)間和吸收光譜，并結(jié)合LC/MS/MS提供的色譜峰質(zhì)譜信息進(jìn)行相關(guān)色譜峰的鑒定和歸屬研究。結(jié)果表明，本研究所建立的HPLC方法可對(duì)該復(fù)方中的主要化學(xué)成分進(jìn)行分析；在HPLC圖譜中共標(biāo)出了20個(gè)主要色譜峰，結(jié)合對(duì)照品對(duì)其中的11個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定和來(lái)源歸屬；此外，對(duì)某些化學(xué)成分進(jìn)行HPLC分離和

7、LC/MS/MS定性，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)推斷出了非洲防已堿、表小檗堿、黃連堿和漢黃芩苷等4個(gè)成分，并判斷了它們的歸屬；對(duì)復(fù)方中15個(gè)色譜峰進(jìn)行的定性和歸屬研究結(jié)果為揭示該復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)、配伍規(guī)律和質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。
　　 五、大黃黃連瀉心湯不同配伍浸漬劑中小檗堿在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究
　　 大黃黃連瀉心湯配伍黃芩后浸漬劑中化學(xué)成分發(fā)生了明顯變化，這些變化必然會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的變化，本研究建立了大鼠血漿中小檗堿的含量測(cè)定

8、方法，對(duì)復(fù)方不同配伍浸漬劑中小檗堿的藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行比較分析。大鼠隨機(jī)分成4組，分別灌胃給予小檗堿原料藥，單味黃連浸漬劑凍干粉，黃連黃芩浸漬劑凍干粉，大黃黃連凍干粉和大黃黃連黃芩凍干粉，于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)采集血樣，血漿經(jīng)處理后采用建立的HPLC法測(cè)定其中的小檗堿濃度，結(jié)合WinNonlin軟件采用非房室模型計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，比較組間差異。結(jié)果表明，大黃黃連瀉心湯組的Cmax最高；大黃黃連黃芩組的AUC0-∞數(shù)值最高；黃連組和小檗堿組的Cmax和

9、AUC0-∞數(shù)值相比較低，且藥時(shí)曲線存在多峰現(xiàn)象；黃連黃芩組這兩個(gè)數(shù)值最小。大黃黃連瀉心湯(大黃+黃連)中的大黃可能促進(jìn)小檗堿的吸收，同時(shí)促使其消除加快；黃芩的存在可能嚴(yán)重阻礙了黃連中小檗堿的吸收。本研究從單個(gè)有效成分藥動(dòng)學(xué)的變化來(lái)嘗試揭示復(fù)方的配伍規(guī)律，為復(fù)方的后續(xù)體內(nèi)研究提供了方法學(xué)借鑒，也為解決復(fù)方組方的爭(zhēng)議提供了一定的參考。
　　 以上研究結(jié)果表明，大黃黃連瀉心湯配伍黃芩后，浸漬劑中的主要化學(xué)成分發(fā)生明顯的變化，大黃蒽醌