2，3-吲哚醌多靶點(diǎn)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞SH-SY5Y凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究2，3-吲哚醌(2，3-dioxoindoline，isatin，ISA)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y細(xì)胞，將SH-SY5Y細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和ISA不同濃度(100、200、400μmol.L-1)處理組，采用熒光染色、DNA1adder分析細(xì)胞凋亡，RT-PCR及Western blotting等方法檢測(cè)不同濃度ISA作用后基因VEGF、bcl-2、bax、survivi

2、n及p53在mRNA和蛋白水平的變化，流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)Caspase-3蛋白水平的變化。 結(jié)果：(1) ISA（O、100、200、400μnol-L-1）作用SH-SY5Y細(xì)胞48 h后，在熒光顯微鏡下觀察到400μmol.L-1 ISA組細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變：核染色質(zhì)聚集、核碎裂、胞質(zhì)濃縮，細(xì)胞凋亡核占(13.67±1.20)％，與對(duì)照組細(xì)胞凋亡核(0.67±0.33)％比較，差異

3、有顯著性（P<0.05）；瓊脂糖凝膠電泳顯示400μmol.L-1ISA處理組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的梯狀條帶。(2) RT-PCR及Western blotting顯示：隨著ISA藥物濃度的增加，bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)、VEGFmRNA及蛋白表達(dá)、survivinmRNA及蛋白表達(dá)均逐漸減少（P<0.05）； bax mRNA及蛋白表達(dá)水平未見明顯變化(P>0.05)；而隨著ISA藥物濃度的增加，野生型p53mRNA及蛋白表達(dá)水平逐漸增

4、加（P<0.05）；并呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。(3) FCM結(jié)果顯示隨著ISA藥物濃度的增加，活化Caspase-3的表達(dá)率分別為18.38％、26.93％、35.66％，明顯高于對(duì)照組(11.23％)（P<0.05）。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)顯示ISA能明顯誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡，可能與ISA作用多個(gè)靶點(diǎn)有關(guān)，(1)降低VEGF的表達(dá)；(2)上調(diào)野生型p53表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞核凋亡誘導(dǎo)途徑；(3)下調(diào)bcl-2表達(dá)水平，降低bcl-2/b