潮汕人群賁門Hpylori感染、CD74表達與上皮增生的相關性研究.pdf

1、背景和目的：
　　幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一種微需氧革蘭氏陰性菌,定植于人上消化道。流行病學資料顯示,全世界人群中的H.pylori感染率超過50％,發(fā)展中國家甚至超過80%。作為“一級致癌因子”,H.pylori感染后引起胃粘膜慢性炎癥,消化性潰瘍,并與胃粘膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤、胃腺癌等消化系統(tǒng)腫瘤密切相關,甚至還與某些血管性疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病、皮膚病、糖尿病等其

2、它系統(tǒng)疾病相關。雖然H.pylori發(fā)現(xiàn)將近30年,但是其感染途徑、發(fā)病機制,特別是與腫瘤發(fā)生發(fā)展機制尚不明確。賁門粘膜組織細胞結構和pH環(huán)境與遠端胃相比,對H.pylori定植、生存、感染有自身特殊性,關于賁門粘膜組織感染H.pylori后,引發(fā)相關病變的報道,較為少見,其H.pylori的致病機制更不明確。研究發(fā)現(xiàn)CD74可作為H.pylori的受體,增強H.pylori的吸附能力,加強其致病性。本實驗首先用改良Giemsa染色、H

3、pylori特異性免疫組織化學染色,檢測H.pylori在潮汕人賁門普查及活檢標本中的分布情況,分析在不同病理改變時H.pylori定植密度的差異;其次運用免疫組織化學染色檢測賁門腺上皮CD74蛋白的表達水平,比較分析CD74蛋白表達水平與H.pylori定植密度的關系,進一步運用Simple同部位標記和消除抗體法、免疫熒光雙重標記技術,觀察CD74蛋白表達與幽門螺桿菌定植分布的原位關系;最后運用免疫組織化學染色檢測Ki-67陽性細胞的

4、增殖指數(shù),分析H.pylori定植密度、CD74蛋白的表達與賁門上皮Ki-67陽性細胞增殖水平之間的關系,初步探討幽門螺桿菌致病機制,為賁門癌前病變的發(fā)生發(fā)展提供一定的根據(jù)。
　　材料和方法：
　　材料：
　　收集汕頭大學附屬腫瘤醫(yī)院、汕頭大學第一附屬醫(yī)院胃鏡室和病理科及揭陽市人民醫(yī)院病理科普查標本共218例,其中男性146例,女性72例,最小年齡22歲,最大年齡80歲,平均年齡56.6歲。
　　方法：
　

5、　1.HE染色
　　常規(guī)HE染色,觀察賁門粘膜的炎癥等級和上皮增生情況。
　　2.Giemsa染色
　　改良Giemsa染色,觀察H pylori在組織中的定植密度和分布。
　　3.免疫組織化學染色
　　SP免疫組織化學法:觀察H pylori免疫陽性細菌在賁門粘膜組織中分布情況;CD74單克隆抗體免疫組織化學染色,觀察腺上皮細胞的表達情況;Ki-67單克隆抗體免疫組織化學染色觀察上皮細胞增生情況。

6、　　4.Simple同部位標記、消除抗體法和免疫熒光雙重標記
　　Simple同部位標記、消除抗體法和免疫熒光雙重標記技術,觀察H pylori和CD74在賁門粘膜組織中的分布,與腺上皮細胞的表達情況,分析幽門螺桿菌的分布位置和CD74的蛋白表達水平的相互關系。
　　5.圖像分析法
　　應用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng),對CD74和Ki-67染色結果分析,CD74蛋

7、白表達水平采樣計算圖像陽性表達的平均光密度,Ki-67采用計算每張切片的陽性標記指數(shù)(Cell proliferation count Cpc),分析表達情況。
　　6.統(tǒng)計分析
　　應用SPSS13.0對統(tǒng)計結果進行分析,采用方差分析,卡方檢驗,Spearman相關分析。
　　結果：
　　1、(1)運用改良Giemsa染色和SP免疫組織化學法檢測H pylori的分布發(fā)現(xiàn):H.pylori主要定植于賁門粘膜表面

8、、腺體的腺腔內和血管的周圍,部分H.pylori具有紅細胞親和性;
　　(2)運用Simple同部位標記、消除抗體法和免疫熒光雙重標記技術分析H pylori的分布位置和CD74的蛋白表達水平的相互關系發(fā)現(xiàn):部分H pylori與CD74強表達的細胞結合緊密。
　　2、運用單向方差分析發(fā)現(xiàn):H pylori感染陰性和H pylori感染陽性賁門粘膜中CD74表達有顯著的統(tǒng)計學差異(p<0.01);在H pylori(+)、H

9、 pylori(++)、H pylori(+++)各組之間,隨H pylori定植密度加重,CD74的表達相應增強,各組間的差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　3、(1)運用卡方檢驗分析H pylori定植密度與炎癥等級之間有顯著統(tǒng)計學意義X2=20.71(p<0.01):炎癥等級隨著幽門螺桿菌感染程度加重而升高。
　　(2)運用單向方差分析CD74蛋白表達水平與炎癥等級有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　4、運

10、用Spearman相關分析顯示:H.pylori定植密度、CD74蛋白表達增強都與Ki-67增殖水平呈正相關(rs分別為0.624和0.515,p<0.01)。
　　結論：
　　1、H.pylori主要定植于賁門粘膜上皮表面和腺體的腺腔內。
　　2、H.Pylori的定植密度與CD74蛋白的表達水平呈正相關,H.Pylori與CD74蛋白強表達的上皮細胞緊密結合,提示CD74作為H.pylori的受體,參與并增強H.p

11、ylori在胃粘膜上皮定植,是H.pylori致病的關鍵環(huán)節(jié)之一,并且CD74蛋白可能在H.Pylori與賁門上皮細胞間的信號傳導中可能發(fā)揮相關的作用。
　　3、H.pylori感染增加賁門粘膜局部炎癥反應,并且CD74蛋白表達增加,提示CD74在H.pylori感染引發(fā)的炎癥反應中發(fā)揮著一定的作用。
　　4、H.pylori定植密度、CD74蛋白表達增強均與Ki-67增殖水平呈正相關,提示前二者相互作用在賁門增生等癌前病變