不同產(chǎn)地巴戟天資源調(diào)查及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究.pdf

1、巴戟天為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的干燥根，是我國(guó)著名的“四大南藥”之一。具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，主要分布于廣東、廣西、福建和海南。前期對(duì)巴戟天的資源調(diào)查顯示，巴戟天栽培面積銳減，野生資源采挖嚴(yán)重，且生態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，巴戟天栽培品與野生品之間、栽培品之間及野生品之間在形態(tài)上均有不同程度的差異。為了獲取巴戟天的最新資源分布情況，本課題首先對(duì)巴戟天的資源分布現(xiàn)狀進(jìn)行了調(diào)查研究。
　　巴戟天藥

2、材含糖量大，其中寡糖具有提高擬癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力、促進(jìn)血管生成、改善生殖等藥理作用，《中國(guó)藥典》（2015年版）將耐斯糖作為巴戟天藥材的含量測(cè)定項(xiàng)，但藥理研究顯示，巴戟天寡糖的抗抑郁成分主要集中在四-七糖。在對(duì)巴戟天進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)的前期研究中發(fā)現(xiàn)，巴戟天藥材中水晶蘭苷和蒽醌的含量隨產(chǎn)地的不同而有很大差異，為完善巴戟天的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，在對(duì)巴戟天資源調(diào)查的基礎(chǔ)上，本課題接著考察了不同產(chǎn)地的巴戟天藥材中寡糖類成分的含量變化情況，以期更加全面

3、地對(duì)巴戟天藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。
　　在對(duì)巴戟天進(jìn)行資源調(diào)查的過程中發(fā)現(xiàn)，肥料對(duì)栽培巴戟天的影響至關(guān)重要，如研究巴戟天中水晶蘭苷含量與速效磷的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，速效磷與水晶蘭苷有顯著正相關(guān)，可通過施加磷肥間接提高巴戟天中水晶蘭苷的含量。為篩選出能提高巴戟天質(zhì)量的優(yōu)質(zhì)肥料，本課題進(jìn)而考察了不同肥料對(duì)巴戟天生長(zhǎng)和同工酶的影響。
　　中藥材的良好生長(zhǎng)形態(tài)及有效物質(zhì)基礎(chǔ)受到植物體遺傳基因的直接控制和外在因素的間接影響，不同產(chǎn)地的巴戟天不僅在外

4、在形態(tài)上發(fā)生了顯著變化，在化學(xué)成分的含量上也存在較大差異。黃璐琦曾提出“道地性越明顯，其基因特化越明顯”的模式假說，為了突出之一著名南藥的道地性，并為巴戟天的分子標(biāo)記、產(chǎn)地鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)，本課題測(cè)定了巴戟天的葉綠體基因組并對(duì)不同產(chǎn)地的葉綠體基因組進(jìn)行了比較分析。
　　本文的主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1、巴戟天的資源調(diào)查研究
　　通過查閱文獻(xiàn)，實(shí)地調(diào)查了巴戟天的主產(chǎn)區(qū)廣東、福建、廣西和海南，并對(duì)不同產(chǎn)地巴戟天進(jìn)行了

5、收集。廣東省巴戟天栽培面積大，肇慶市德慶縣巴戟天種植面積約3333公頃，總產(chǎn)量約7500 t，廣東省巴戟天根據(jù)平均葉長(zhǎng)主要分為小葉型、大葉型和柳葉型;福建省栽培巴戟天主要集中在南靖縣和溪鎮(zhèn)的迎新村和吉春村，根據(jù)平均葉長(zhǎng)主要分為小葉型、大葉型和大葉偏圓型，野生巴戟天有的品種葉呈簇狀聚集;廣西防城港市防城區(qū)那梭鎮(zhèn)野生巴戟天根據(jù)葉片大小無明顯區(qū)分;海南省樂東縣尖峰嶺國(guó)家森林公園和儋州市南藥種質(zhì)資源圃有若干株野生巴戟天，根據(jù)葉片大小無明顯區(qū)分。

6、
　　2、不同產(chǎn)地的巴戟天藥材寡糖含量分析
　　采用HPLC-ELSD法測(cè)定了32批不同產(chǎn)地的巴戟天藥材中蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖和1F-果呋喃耐斯糖的含量，考察了不同產(chǎn)地對(duì)巴戟天寡糖含量的影響，不同產(chǎn)地巴戟天藥材中蔗糖、耐斯糖和1F-果呋喃耐斯糖含量以廣東最高，1-蔗果三糖含量廣東與福建相近，廣西和海南最低;廣東省不同葉型巴戟天藥材中小葉型巴戟天藥材各寡糖含量遠(yuǎn)高于大葉型;不同生長(zhǎng)年限巴戟天藥材中2.5年生巴戟天藥材蔗糖

7、和1-蔗果三糖含量最高，4年生巴戟天藥材耐斯糖和1F-果呋喃耐斯糖含量最高。
　　3、肥料對(duì)巴戟天生長(zhǎng)和同工酶的影響
　　采用單因子隨機(jī)設(shè)計(jì)將巴戟天盆栽植物分為空白、有機(jī)肥、無機(jī)肥、寡糖肥和微肥5個(gè)處理組。測(cè)定施肥前后每組巴戟天的株高和葉片大小，并對(duì)不同肥料處理后巴戟天葉中過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)、酯酶(EST)、細(xì)胞色素氧化酶(CYT)和蘋果酸脫氫酶(MDH)同工酶進(jìn)行電泳分析。

8、生長(zhǎng)參數(shù)顯示微肥處理組巴戟天株高增長(zhǎng)顯著，其次為無機(jī)肥處理組和寡糖肥處理組，有機(jī)肥處理組與空白對(duì)照組相比增長(zhǎng)緩慢。同工酶酶譜顯示施用無機(jī)肥和寡糖肥的巴戟天POD、SOD、EST和MDH酶活性增強(qiáng)，施用微肥的巴戟天CYT和MDH酶活性增強(qiáng)。結(jié)合巴戟天的生長(zhǎng)狀況和同工酶酶譜特征，施用無機(jī)肥和寡糖肥更利于巴戟天的生長(zhǎng)。
　　4、巴戟天葉綠體基因組序列測(cè)定及不同產(chǎn)地基因組比較研究
　　利用Illumina的Hiseq2500測(cè)序平臺(tái)

9、，測(cè)定了巴戟天的葉綠體基因組，巴戟天葉綠體基因組全長(zhǎng)153，398 bp，與其它被子植物相似，呈典型的四段式結(jié)構(gòu)。
　　通過比較不同產(chǎn)地巴戟天葉綠體基因組發(fā)現(xiàn)，廣東省巴戟天樣品的葉綠體基因組相同，福建、廣西和海南巴戟天樣品的葉綠體基因組與廣東省巴戟天樣品相比存在變異。福建、廣西和海南的巴戟天樣品葉綠體基因組在長(zhǎng)單拷貝區(qū)和短單拷貝區(qū)有不同程度的插入缺失突變，反向重復(fù)區(qū)較為保守，沒有插入缺失變異。不同產(chǎn)地巴戟天葉綠體基因組單堿基突變主