可溶性hPPARγ-LBD重組蛋白的制備及功能表征.pdf

1、癌癥是人類最難攻克的頑癥之一。目前臨床上的抗腫瘤藥物均存在毒性大、選擇性差等問題,為此,開發(fā)高效低毒的抗腫瘤藥物具有十分重要的意義。
　　 近年來,國內(nèi)外針對抗腫瘤藥物的研究正從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物轉(zhuǎn)向針對腫瘤信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中多環(huán)節(jié)作用靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物,其中的熱點(diǎn)之一就是以脂代謝信號傳導(dǎo)途徑中關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白PPAR7亞型(peroxisome proliferater-activated receptorγ,PPARγ)作為藥物

2、靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究,此類藥物研究的難點(diǎn)在于獲取大量高純度、具有生物學(xué)功能的靶點(diǎn)重組蛋白。為此,本文采用六聚組氨酸(His6)為標(biāo)簽,構(gòu)建了pReceiver-B01-hPPARγ-LBD表達(dá)載體,通過表達(dá)純化得到可溶性的hPPARγ-LBD(human peroxisome proliferater-activated receptorγligand binding domain,hPPARγ-LBD)重組蛋白,有利于進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)

3、和功能；并采用分子排阻色譜.高效液相色譜法(size exculsion
　　 chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)對hPPARγ-LBD重組蛋白與配體藥物的結(jié)合活性進(jìn)行了研究,為以hPPARγ-LBD重組蛋白為靶點(diǎn)蛋白的藥物設(shè)計及篩選奠定了基礎(chǔ)。
　　 本文完成的主要工作和結(jié)論如下:
　　 1.制備了hPPARγ-LBD重

4、組蛋白。經(jīng)SDS-PAGE分析,該重組蛋白的分子量約為32 kDa,與理論分子量一致。
　　 2.優(yōu)化了hPPARγ-LBD重組蛋白的表達(dá)條件。在優(yōu)化條件(16℃,0.6 mmol/L IPtG,誘導(dǎo)20 h)下,能表達(dá)可溶性的hPPARγ-LBD重組蛋白。
　　 3.優(yōu)化了hPPARγ-LBD重組蛋白的純化條件。經(jīng)鎳親和色譜純化后,以每升LB培養(yǎng)基計可獲得41 mg、純度為95％的hPPARγ-LBD重組蛋白。