單核細(xì)胞趨化蛋白-1對大鼠試驗性視網(wǎng)膜脫離過程中光感受器細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：1.探討MCP-1在Brown Norway大鼠試驗性視網(wǎng)膜脫離中的表達(dá)，及其與視網(wǎng)膜脫離過程中光感受器細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。2.探討干預(yù)脫離的視網(wǎng)膜MCP-1的表達(dá)，光感受器細(xì)胞凋亡的變化。 方法： (1)取3 7只Brown Norway大鼠右眼建立視網(wǎng)膜脫離模型，左眼自身對照。排除因死亡，眼內(nèi)炎和視網(wǎng)膜出血等不符合視網(wǎng)膜脫離模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠7只。剩余30只大鼠按預(yù)處理時間點(1小時，6小時，12小時，24小時和72

2、小時)隨機分為五組，每組6只。預(yù)定時間點處死大鼠，取出眼球。免疫組化技術(shù)檢測實驗眼與對照眼視網(wǎng)膜外核層MCP-1的表達(dá)；TUNEL原位末端標(biāo)記法檢測實驗眼與對照眼外核層凋亡細(xì)胞陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)。統(tǒng)計軟件分析MCP-1與TUNEL表達(dá)的相關(guān)性。 (2)9只Brown Norway大鼠雙眼建立視網(wǎng)膜脫離模型后，沿原穿刺口右眼視網(wǎng)膜下注射抗大鼠MCP-11gG抗體，左眼注射等容積的PBS。排除因死亡，眼內(nèi)炎和視網(wǎng)膜出血等不符合視網(wǎng)膜脫離

3、模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠3只。剩余6只大鼠模型建立后72小時處死，剜出眼球，制作石蠟切片，應(yīng)用TUNEL原位末端標(biāo)記法計數(shù)外核層陽性細(xì)胞。統(tǒng)計學(xué)方法比較72小時視網(wǎng)膜脫離組，MCP-1干預(yù)組和假干預(yù)組的外核層凋亡細(xì)胞的表達(dá)。 結(jié)果： (1)免疫組化：正常視網(wǎng)膜MCP-1很少表達(dá)，點狀分布于內(nèi)核層，外核層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，每個高倍鏡下外核層陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)平均為3.64±1.02。試驗性視網(wǎng)膜脫離模型建立1小時、6小時、12小時、24小

4、時和72小時后MCP-1表達(dá)主要分布于外核層，內(nèi)核層與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層較少表達(dá)，外核層高倍鏡下MCP-1陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)分別為10.5 0±2.82、11.13±3.31、25.23±5.56、3 7.23±7.1 5和205.83±1 5.23，與對照組均有統(tǒng)計學(xué)差異。視網(wǎng)膜脫離組之間相互比較，除視網(wǎng)膜脫離1小時和6小時無統(tǒng)計學(xué)差異外，其余各組均有顯著性差異(P<0.05)。 (2)TUNEL：正常視網(wǎng)膜外核層TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)為

5、2.1 6±1.3 3/mm2，試驗性視網(wǎng)膜脫離模型建立1小時、6小時、12小時、24小時和72小時外核層TUNEL陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)分別為1 5.30±3.21/mm2、25.11±5.3 1/mm2、4 1.32±7.5 6/mm2、80.23±10.1 5/mm2和425.83±2 5.23/mm2。 (3)各組大鼠實驗眼視網(wǎng)膜ONL內(nèi)MCP-1及TUNEL陽性細(xì)胞均于RD后1h開始升高，隨時間延長表達(dá)增加，72小時達(dá)到高峰，

6、二者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.905)。 (4)視網(wǎng)膜脫離后72小時MCP-1干預(yù)組和PBS假干預(yù)組外核層TUNEL陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)為1 60.24±10.5 6/mm2和430.15±30.42/mm2。MCP-1干預(yù)組與視網(wǎng)膜脫離組統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性差異(p<0.05)，而PBS假干預(yù)組與視網(wǎng)膜脫離組統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異(p>0.05)。 結(jié)論：(1)MCP-1在大鼠試驗性視網(wǎng)膜脫離模型建立后1小時即明顯表達(dá)，隨時間延