pIERS-EGFP-VEGF質(zhì)粒側(cè)腦室注射對(duì)大鼠腦缺血再灌注的保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：研究側(cè)腦室注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白表達(dá)質(zhì)粒對(duì)缺血性神經(jīng)元損傷的影響及其可能的作用機(jī)制。 方法：對(duì)pIRES—EGFP/VEGF質(zhì)粒進(jìn)行鑒定，然后進(jìn)行大量的擴(kuò)增，提取，調(diào)整濃度，予側(cè)腦室注入質(zhì)粒制備質(zhì)粒組大鼠模型，用大腦中動(dòng)脈(MCA)線栓法制備大鼠局灶性缺血/再灌注模型。缺血2小時(shí)，再灌注24小時(shí)后，處死大鼠，斷頭取腦，采用TTC染色和圖像分析處理系統(tǒng)測(cè)量梗塞灶大小，western—blot檢測(cè)鼠腦中p—AKT

2、蛋白的表達(dá)，并用電鏡觀察缺血大鼠的超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：①M(fèi)CAO2小時(shí)，再灌注24小時(shí)后，TTC顯色結(jié)果顯示，腦梗死體積在不同處理組有明顯差異。假手術(shù)組的腦梗死體積為0，而陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)組，即VEGF質(zhì)粒組右腦梗死體積較缺血組右腦梗死體積明顯減小(P<0.01)，證明表達(dá)大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子質(zhì)粒pIERS—EGFP/VEGF具有一定的神經(jīng)損傷保護(hù)作用。②Western—blot檢測(cè)鼠腦中p—AKT蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組

3、及假手術(shù)組比較，缺血組與質(zhì)粒組的p—AKT表達(dá)均顯著增多(P<0.01)，質(zhì)粒組與缺血組比較p—AKT的表達(dá)也顯著增多(P<0.01)。③電鏡觀察顯示：假手術(shù)組與正常組細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)元排列整齊，核膜光滑完整，核仁居中，邊界明顯；缺血組再灌注24h神經(jīng)元排列紊亂，核膜呈波浪狀，染色質(zhì)濃縮成塊，線粒體水腫，膜雙層結(jié)構(gòu)模糊不清，嵴斷裂甚至消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張；質(zhì)粒組再灌注24h神經(jīng)元胞體和胞核腫脹，核膜清晰，染色質(zhì)稍增多、邊聚。線粒體