發(fā)酵蛹蟲草胞外多糖的分離提取及對巨噬細(xì)胞的激活作用研究.pdf

1、蛹蟲草(CordycepsmilitarisL；Sp，PL)是一種傳統(tǒng)名貴中藥材，具有多種療效。但是天然產(chǎn)量十分稀少，因此采用發(fā)酵技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)并提取一些有效成分具有十分重要的意義。本文對蛹蟲草發(fā)酵條件及胞外多糖及該多糖對巨噬細(xì)胞的激活作用進(jìn)行了研究。 本研究以蛹蟲草的無性型為菌種(ACCC50383)，通過對蛹蟲草進(jìn)行液體培養(yǎng)發(fā)酵條件對胞外多糖產(chǎn)量的影響的研究，確定了生產(chǎn)蛹蟲草胞外多糖的最佳發(fā)酵條件：發(fā)酵時間為4-6天、發(fā)酵溫

2、度為24℃、最初發(fā)酵液pH值為7.0、葡萄糖作為碳源、大豆蛋白胨作為氮源。 利用CM-52纖維素層析柱，對蛹蟲草粗多糖進(jìn)行了分離純化，得到一種純化多糖組分(CPS)。純度分析顯示CPS為純的多糖組分、相對分子質(zhì)量34,938，紫外吸收光譜顯示多糖中不含蛋白和核酸成分，多糖的單糖組成成分為甘露糖。IR顯示胞外多糖具有多糖的特征吸收峰，該多糖具β-D-吡喃型糖苷鍵。 NO是一種重要的參與機體炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)的介質(zhì)分子。CP

3、S體外給藥48h可促進(jìn)巨噬細(xì)胞RAW264.7NO的釋放，隨給藥濃度(50mg/L，100mg/L，200mg/L，400mg/L)增加，作用增強，藥物作用呈量效關(guān)系。多粘菌素B通過與脂質(zhì)A的結(jié)合從而阻止LPS對巨噬細(xì)胞的激活，經(jīng)過多粘菌素B預(yù)處理的CPS并不影響巨噬細(xì)胞NO的生成，而經(jīng)過多粘菌B預(yù)處理的LPS與沒有處理過的LPS相比，刺激巨噬生成NO的能力大大降低。此結(jié)果顯示，CPS中不具有與LPS相同的脂質(zhì)A結(jié)構(gòu)。表明CPS與巨噬細(xì)