高脂肥胖SD大鼠肝臟內(nèi)OB-Rb、SOCS3mRNA表達(dá)的研究.pdf

1、背景：肥胖癥是由于機(jī)體能量代謝失衡，熱量攝入長(zhǎng)期超過人體的消耗而導(dǎo)致體內(nèi)脂肪過度積聚、體重超過一定范圍的一種營(yíng)養(yǎng)障礙性疾病。由于人們生活水平提高、膳食結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，兒童肥胖癥已呈逐年增多的趨勢(shì)。肥胖不僅影響小兒健康，還將成為成年期高血壓、糖尿病、冠心病、膽石癥、痛風(fēng)等疾病和猝死的誘因。瘦素(Leptin)的發(fā)現(xiàn)，為肥胖機(jī)制的認(rèn)識(shí)提供了新的視野。Leptin具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)：抑制攝食、促進(jìn)能量消耗、調(diào)節(jié)代謝、影響激素分泌、生殖、免疫和

2、血管增生等，而這些作用的發(fā)揮需要與其特異的受體(OB-R)結(jié)合。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，Leptin基因突變導(dǎo)致血液循環(huán)中的瘦素缺乏，是引起肥胖的原因之一。但在獲得性肥胖鼠模型和絕大多數(shù)肥胖癥患者中，其血清瘦素水平升高。他們這種對(duì)leptin反應(yīng)減弱或無反應(yīng)的現(xiàn)象稱為瘦素抵抗，肥胖癥的發(fā)生可能與瘦素抵抗有關(guān)。向飲食誘導(dǎo)的肥胖鼠中樞注射外源性重組瘦素并無療效，提示提示瘦素抵抗可能發(fā)生在受體/受體后轉(zhuǎn)導(dǎo)水平。 Janus蛋白激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)

3、錄激活蛋白(JAK-STAT)途徑是瘦素信號(hào)傳導(dǎo)的主要途徑。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制物-3(SOCS3)作為leptin受體后JAK/STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路的主要負(fù)性調(diào)節(jié)因子，可能參與了Leptin抵抗。細(xì)胞水平的研究證實(shí)瘦素可引起細(xì)胞內(nèi)SOCS3水平升高，后者與JAK2結(jié)合，抑制JAK2和瘦素受體的酪氨酸磷酸化，從而阻止了瘦素信號(hào)沿著JAK/STAT通路的傳導(dǎo)。和野生型相比，SOCS3異質(zhì)性缺失小鼠對(duì)瘦素的敏感性增加，下丘腦瘦素受體對(duì)外源瘦

4、素信號(hào)的反應(yīng)性增強(qiáng)，并可抵御高脂食物誘導(dǎo)的肥胖以及相關(guān)代謝綜合癥的產(chǎn)生。因此抑制下丘腦SOCS3的表達(dá)或許可以有效治療瘦素抵抗導(dǎo)致的肥胖。 目的：本實(shí)驗(yàn)為模擬兒童肥胖的特點(diǎn)，以生后4周(相當(dāng)于幼年期)SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，利用高脂飼料制備幼年肥胖大鼠模型，研究肥胖大鼠周圍組織(肝臟)內(nèi)長(zhǎng)型OB-R(OB-Rb)mRNA及SOCS3mRNA表達(dá)的改變。從瘦素受體基因表達(dá)和瘦素受體后JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路水平來研究瘦素抵抗的可能

5、發(fā)生機(jī)制，初步探討肥胖大鼠肝臟組織中OB-RbmRNA、SOCS3mRNA與高leptin血癥的關(guān)系以及OB-RbmRNA與SOCS3mRNA表達(dá)的關(guān)系。以動(dòng)物模型為基礎(chǔ)探討兒童肥胖癥leptin抵抗的可能發(fā)生機(jī)制。方法：4周齡健康、雄性SD大鼠32只隨機(jī)分為兩組，一組20只作實(shí)驗(yàn)組，平均體重(77.47±7.90)g，予以高脂飼料喂養(yǎng)以誘導(dǎo)肥胖形成；另一組12只作對(duì)照組，平均體重(78.83±6.90)g，予以普通飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)期間自

6、由飲水，不限制飼料量，每周測(cè)體重1次，以超出對(duì)照組平均體重20﹪為肥胖標(biāo)準(zhǔn)確定肥胖組。飼養(yǎng)8周末，對(duì)肥胖鼠及對(duì)照鼠禁食12小時(shí)后采血、分離血清，處死后迅速取出肝臟。采用放射免疫法檢測(cè)血清瘦素、胰島素以及C肽含量；分析肥胖組血清瘦素水平與胰島素、C肽含量的相關(guān)性。血糖、血總膽固醇及甘油三脂由美國ABB OTTCCX．Ⅱ型全自動(dòng)生化分析儀完成；用半定量RT-PCR方法，以B-actin為內(nèi)對(duì)照檢測(cè)肝臟內(nèi)OB-Rb、SOCS3mRNA的表達(dá)水

7、平，并分析飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠肝臟中OB-Rb、SOCS3mRNA表達(dá)量的相關(guān)性以及兩者與血清瘦素含量的相關(guān)性。 結(jié)果： 1．高脂飼料喂養(yǎng)的SD大鼠體重增加較普通飼料喂養(yǎng)的對(duì)照組明顯，至4周時(shí)達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。喂養(yǎng)8周末，以超出對(duì)照組平均體重20﹪作為肥胖標(biāo)準(zhǔn)，則實(shí)驗(yàn)組中共有15只大鼠成為肥胖模型(75﹪)，平均體重(416.33±23.01)g，對(duì)照組平均體重為(321.92±19.65)g，兩組間差別具有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。肥胖組大鼠血糖、甘油三脂及膽固醇水平均明顯高于對(duì)照組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2．肥胖組大鼠血清瘦素、胰島素、C肽含量均顯著高于正常對(duì)照組，兩組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。肥胖組大鼠血清leptin含量與血清胰島素、 C肽濃度均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.608，P<0.05和r=0.686，P<0.01)。 3．肥胖組大鼠肝臟中OB-Rb的mRNA水平(相對(duì)灰度值)為0.79±0.29，明顯

9、低于正常對(duì)照組1.63±0.62，兩組間差異顯著(P<0.01)。肥胖組血清瘦素含量與肝臟OB-Rb的mRNA水平呈顯著負(fù)相關(guān)，其決定系數(shù)r<'2>為0.523(P<0.01)。 4．肥胖組大鼠肝臟中SOCS3的mRNA水平(相對(duì)狄度值)為1.42±0.65，明顯高于正常對(duì)照組0.54±0.12，兩組間差異顯著(P<0.01)。肥胖組血清瘦素含量與肝臟內(nèi)SOCS3的mRNA水平呈顯著正相關(guān)，其決定系數(shù)r<'2>為0.624(P<

10、0.01)。 5．高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠肝臟內(nèi)OB-Rb的mRNA水平(相對(duì)灰度值)與SOCS3mRNA水平(相對(duì)灰度值)無明顯相關(guān)關(guān)系，決定系數(shù)r<'2>為0.154(P>0.05)。 結(jié)論： 1．高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠血清leptin水平升高，并且與胰島素、C肽含量呈正相關(guān)，提示高脂飲食可誘導(dǎo)leptin抵抗的發(fā)生。高瘦素血癥可能參與胰島素抵抗的形成。 2．在周圍組織(肝臟)中肥胖組大鼠長(zhǎng)型瘦素受體的