Ri質(zhì)粒介導(dǎo)八角蓮遺傳轉(zhuǎn)化及毛狀根鬼臼毒素產(chǎn)生的初步研究.pdf

1、八角蓮Dysosmaversipellis(Hance)M.Cheng，隸屬小檗科(Berberidaceae)，藥名鬼臼，為我國特有的瀕危藥用植物，其有效成分鬼臼毒素具有很強的抗腫瘤活性。而含鬼臼毒素的野生植物資源，由于人們多年濫挖亂采，資源瀕于滅絕，難以滿足醫(yī)藥領(lǐng)域的需要。本研究以八角蓮無菌苗為材料，利用植物生理學(xué)、分子生物學(xué)、化學(xué)成分分析等研究方法與技術(shù)，建立了Ri質(zhì)粒介導(dǎo)的八角蓮毛狀根的遺傳轉(zhuǎn)化體系，并對誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化形成的毛狀根中的

2、鬼臼毒素含量進行了分析，其主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： (1)首次利用發(fā)根農(nóng)桿菌15834建立起藥用植物八角蓮毛狀根遺傳轉(zhuǎn)化體系。發(fā)根農(nóng)桿菌15834感染八角蓮莖段外植體30d后，從其切口處產(chǎn)生毛狀根。在含NAA1.0mg/l和KT0.2mg/lMS培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)3d、無外源生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基共培養(yǎng)3d及添加100umol/l乙酰丁香酮，每天光照6h可得到較好的轉(zhuǎn)化效果，毛狀根的誘導(dǎo)率最高可達到30.9％。八角蓮毛狀根能在無外源

3、激素的1/2MS固體培養(yǎng)基上快速自主生長。 (2)對八角蓮毛狀根基因組DNA，采用根據(jù)發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒基因組設(shè)計的引物，通過PCR檢測、PCR-Southern雜交分析，結(jié)果表明：所獲得的八角蓮毛狀根在564bp處有與rolC基因相同大小條帶存在，發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒的rolC基因己整合到八角蓮毛狀根基因組并得到了表達。 (3)對在不同培養(yǎng)條件下形成的八角蓮毛狀根株系，以及由八角蓮毛狀根所形成的愈傷組織，采用化學(xué)方法提取