長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19在胃癌中作用及調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、背景：
　　胃癌是最常見(jiàn)的消化道腫瘤，發(fā)病率高，預(yù)后差。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著極其重要的作用。課題前期研究發(fā)現(xiàn)lncRNA H19在胃癌組織中高表達(dá)，來(lái)源于H19第一個(gè)外顯子的miR-675在胃癌組織中表達(dá)與H19一致，兩者呈正相關(guān)。
　　方法：
　　本課題對(duì)74對(duì)胃癌組織H19和miR-675表達(dá)水平進(jìn)行定量real-time PCR分析，收集患者各項(xiàng)臨床病理資料并隨訪患者生存期（隨

2、訪9-53個(gè)月，中位27個(gè)月），進(jìn)行相關(guān)性分析；分別構(gòu)建H19和miR-675在MKN45細(xì)胞株敲低表達(dá)模型MKN45(KD)和SGC-7901細(xì)胞株的過(guò)表達(dá)模型SGC-7901(OE)，運(yùn)用CCK8細(xì)胞增殖、Transwell遷移、侵襲、劃痕愈合等細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)以及裸鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究H19和miR-675對(duì)于細(xì)胞生物學(xué)行為的影響；對(duì)表達(dá)譜芯片中差異基因進(jìn)行篩選，結(jié)合KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)和基因功能數(shù)據(jù)庫(kù)分析，構(gòu)建H19共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，運(yùn)用RNA結(jié)合蛋白

3、免疫共沉淀（RIP）技術(shù)和雙熒光素酶報(bào)告基因（DLR）系統(tǒng)結(jié)合Western免疫印跡和免疫組化，研究H19和miR-675的調(diào)控機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)對(duì)74例胃癌手術(shù)患者的隨訪，結(jié)合臨床病理資料分析,發(fā)現(xiàn)H19和miR-675在胃癌組織中表達(dá)顯著升高，且H19表達(dá)水平是影響胃癌患者預(yù)后的因素之一。高表達(dá)與低表達(dá)患者的總生存期（OS）的差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.036）；對(duì)MKN45（KD）模型和SGC7901（O

4、E）模型的細(xì)胞學(xué)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，過(guò)表達(dá)H19和miR-675可以顯著增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲以及成瘤能力；相反地，敲低H19和miR-675的表達(dá)，細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲以及成瘤能力顯著減弱。根據(jù)H19基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，將可能與H19存在相互作用的候選基因，通過(guò)RIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ISM1是與H19相互作用的靶基因,H19與ISM1的表達(dá)呈正相關(guān)；DLR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CALN1是miR-675的靶基因，miR-675與CALN1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

5、r>　　結(jié)論：
　　H19在胃癌組織中表達(dá)較正常組織顯著升高，單因素分析顯示H19是影響胃癌患者預(yù)后的因素之一；過(guò)表達(dá)H19可以顯著增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、成瘤以及轉(zhuǎn)移等惡性生物行為；H19和miR-675的表達(dá)一致，呈正相關(guān)，但是兩者的生物學(xué)功能并不吻合，H19的功能不僅僅是作為miR-675的前體通過(guò)miR-675發(fā)揮作用。ISM1是H19的靶基因；CALN1是miR-675的靶基因。H19和miR-675在胃癌發(fā)生發(fā)