PTEN和MVD在口腔鱗癌中表達與生物學行為相關性研究.pdf

1、目的：口腔鱗癌(Oralsquamouscellcarcinoma，OSCC)是口腔最常見的惡性腫瘤，嚴重危害人類健康，但其發(fā)生、發(fā)展的機制尚不清楚。同其它腫瘤一樣，口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多階段、多步驟漸進演化的過程。已有的研究表明許多癌基因的激活及抑癌基因的失活參與了這一過程。PTEN(phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosome10)基因是1997年發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因，其

2、功能十分復雜，具有參與胚胎正常發(fā)育，誘導細胞凋亡，引起G1期細胞阻滯，抑制細胞遷移，鋪展和局部粘附功能，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。新生血管可為腫瘤提供營養(yǎng)物質(zhì)，刺激腫瘤的生長，同時也是腫瘤播散轉(zhuǎn)移的前提，因此腫瘤血管的生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要條件。在口腔鱗癌中PTEN能否通過調(diào)節(jié)血管的生成來抑制腫瘤，尚不十分明確。本實驗主要通過對口腔鱗癌組織中PTEN蛋白和微血管密度(microvesseldensity,MVD)的檢測，旨

3、在從蛋白質(zhì)水平探討抑癌基因PTEN及MVD與口腔鱗癌發(fā)生和發(fā)展的關系及其作用機理，并進一步分析二者之間的相關性，為口腔鱗癌的預防和治療提供新的方法；同時探討組織芯片在腫瘤研究中應用的可行性。 方法：收集口腔鱗癌及相關組織手術切除標本和相應的臨床病理資料，分為五組：正?？谇徽衬ど掀?0例；口腔上皮單純性增生10例；口腔粘膜白斑15例(伴輕度不典型增生的7例、中度不典型增生的5例、重度不典型增生的3例)；口腔鱗癌72例(伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

4、移的原發(fā)灶37例、不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶35例)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶37例。通過構(gòu)建組織芯片(tissuechips)結(jié)合免疫組織化學鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶染色法(streptavidinproxidoseimmunohistochemistrymethod，SP法)檢測正?？谇徽衬ど掀?、口腔上皮單純性增生、口腔粘膜白斑和口腔鱗癌組織及相應的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中PTEN蛋白和微血管密度(用CD34標記)的表達情況，同時分析PTEN和MVD與臨

5、床病理參數(shù)的關系，并分析PTEN與MVD的相關性。結(jié)果用SPSS11.5forwindows統(tǒng)計軟件包進行分析。PTEN蛋白陽性表達率的比較采用X2檢驗；MVD用(-x)±s表示并采用t檢驗分析；相關性分析采用Spearman's等級相關分析法分析，口腔鱗癌與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中PTEN的表達強度的比較采用配對樣本比較的Wilcoxon符號秩檢驗，以P＜0.05作為差異有顯著性的標準。 結(jié)果：(1)組織芯片蠟塊蠟質(zhì)細膩均勻，無開裂現(xiàn)象

6、，除一點略有移位外，可見163點整齊排列。切片經(jīng)染色后無脫片和扭曲，符合觀察的需要。(2)PTEN陽性部位在細胞核，呈黃色、棕黃色、黃褐色顆粒，其在正?？谇徽衬ぁ⒖谇簧掀渭冃栽錾?、口腔粘膜白斑(伴輕、中、中度不典型增生)、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達率分別為100％(10/10)、100％(10/10)、93.33％(14/15)、85.71％(30/35)、59.46％(22/37

7、)、35.14％(13/37)。很明顯，從正?？谇徽衬ぁ谇徽衬ぐ┣安∽儭鸁o轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌→有轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌→淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，PTEN基因的表達呈逐漸降低趨勢。正常口腔粘膜組與口腔粘膜癌前病變組比較，PTEN基因的表達無統(tǒng)計學意義(X2=1.373，P=0.241＞0.05)；口腔粘膜癌前病變組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶比較，PTEN基因的表達也無統(tǒng)計學意義(X2=0.577，P=0.447＞0.05)；但口腔粘膜癌前病變組與有淋巴

8、結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌原發(fā)灶比較，PTEN基因的表達差異有統(tǒng)計學意義(X2=5.749，P=0.016＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶中PTEN基因的表達率明顯降低(X2=6.180，P=0.013＜0.05)，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達率又比相應的原發(fā)灶中的表達率進一步降低(X2=4.391，P=0.036＜0.05)。PTEN的陽性表達率在不同性別、年齡、病程、腫塊大小、癌組織浸潤深度和pTNM分期等臨床病理參數(shù)間無

9、統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；但與口腔鱗癌的組織分化程度有統(tǒng)計學意義(X2=17.214，P=0.000＜0.05)。(3)在正?？谇徽衬?、口腔上皮單純性增生和口腔粘膜白斑組織中MVD值分別為46.50±3.81、47.30±5.29和49.27±3.15，在口腔鱗癌組織中MVD值為66.14±4.31，差異有統(tǒng)計學意義(t='21.50，P=0.000＜0.05)。很明顯，從正?？谇徽衬ぁ谇徽衬ぐ┣安∽儭谇击[癌，MVD值呈逐漸增高趨

10、勢；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD值為67.62±4.03，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD值為65.06±4.01，兩者間的差異有統(tǒng)計學意義(t=-2.704，P=0.009＜0.05)。MVD值與性別、年齡、病程、腫塊大小、癌組織浸潤深度和pTNM分期等臨床病理參數(shù)間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；(4)PTEN陽性組MVD值為65.69±4.09，顯著低于PTEN陰性組的MVD值68.15±4.04，二者之間差異有統(tǒng)計學意義(t=-2.291，P=0

11、.025＜0.05)。經(jīng)Spearman's相關性分析，PTEN與MVD二者呈負相關，差異有統(tǒng)計學意義(rs=-0.371，P=0.001＜0.05)。 結(jié)論：(1)組織芯片具有高通量、高效率、節(jié)省試劑和時間等優(yōu)點，并且使各組織的實驗條件相同，減少了實驗誤差，在大樣本研究中具有明顯的優(yōu)勢。(2)PTEN蛋白在正?？谇徽衬?、口腔上皮單純增生、口腔粘膜白斑組織中呈強陽性表達，在口腔鱗癌組織中表達減低，提示PTEN可能在口腔鱗癌的發(fā)生

12、發(fā)展中起著重要作用，并可能是口腔鱗癌組織細胞惡性轉(zhuǎn)化的原因之一。(3)PTEN蛋白的表達與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小等臨床病理參數(shù)無相關性，但與口腔鱗癌的組織分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，提示PTEN有可能作為口腔鱗癌分級和臨床判斷患者預后的新的預示指標。(4)MVD值在口腔鱗癌組織中明顯高于正?？谇徽衬?、口腔上皮單純增生和口腔粘膜白斑，說明微血管的生成有利于腫瘤的生長；MVD值與口腔鱗癌的病理分級、臨床分期等無關，但與淋巴結(jié)