吡非尼酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化的作用研究.pdf

1、研究背景及目的：肝纖維化（HF）是繼發(fā)于各種原因引起的肝臟炎癥或損傷后組織修復(fù)過(guò)程中的代償反應(yīng)，以細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）特別是膠原在肝內(nèi)過(guò)量沉積為病理特征。許多慢性肝臟疾病都會(huì)發(fā)生HF。如果HF得不到有效控制，將會(huì)發(fā)展為肝硬化，甚至部分病例會(huì)演變?yōu)楦伟?。近年?lái)一些研究顯示，HF是慢性肝病發(fā)展過(guò)程中唯一具有可逆性的中間環(huán)節(jié)，通過(guò)正確合理的治療，HF可以減輕，甚至痊愈。但是，目前臨床上仍缺乏公認(rèn)有理想效果的抗肝纖維化藥物。因此，HF的防治研究

2、在今后一定時(shí)期內(nèi)仍是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)及難點(diǎn)問(wèn)題。 吡非尼酮（pirfeudone，PFD）是20世紀(jì)70年代合成的小分子化合物。最初研究發(fā)現(xiàn)PFD具有一定的抗炎作用，近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)它對(duì)于組織的纖維化具有抑制作用，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了PFD在抗纖維化方面的顯著療效。特別是在特發(fā)性肺纖維化方面，發(fā)現(xiàn)PFD比其他一些常用藥物的臨床療效更好，尚未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)。PFD抗纖維化作用的機(jī)制尚處于研究之中，但已有研究證明PFD是一種有效的細(xì)

3、胞因子抑制劑，能夠通過(guò)參與調(diào)節(jié)某些因子，抑制成纖維細(xì)胞的生物學(xué)活性，導(dǎo)致細(xì)胞增殖受抑，基質(zhì)膠原合成減少。目前發(fā)現(xiàn)PFD作用的靶因子主要有以下幾種：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β1）、血小板衍化生長(zhǎng)因子（PDGF）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）和其他炎癥因子等。 國(guó)外對(duì)PFD的研發(fā)比較早。1994年美國(guó)就有人申請(qǐng)了PFD的抗纖維化作用的專利。PFD的出現(xiàn)可能是纖維化防治的新開(kāi)端，具有新藥開(kāi)發(fā)的良好前景

4、。但我國(guó)目前對(duì)PFD在抗肝纖維化方面的研究開(kāi)發(fā)尚屬空白。本課題旨在研究PFD在二甲基亞硝胺（dimethylnitrosamine，DMN）誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化中的抑制作用，為臨床抗肝纖維化治療提供新的途徑。 方法：45只雄性Wistar大鼠隨機(jī)均分為正常組、模型組及干預(yù)組。干預(yù)組及模型組均腹腔內(nèi)注射1％DMN（10mg/kg·d，3次/周，共4周）用作HF造模；正常組注射等體積生理鹽水。干預(yù)組同時(shí)給予PFD灌胃（500 mg/k

5、g，1次/日，共四周）；模型組及正常組則以等量生理鹽水灌胃。4周末麻醉大鼠，取心臟血，稱量肝、脾濕重并收取肝組織；蘇木精-伊紅染色（HE染色）和Masson染色觀察HF的形成；隨機(jī)抽取樣本透射電鏡觀察肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）及TGF-β1；全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、

6、總膽紅素（TBIL）和白蛋白（ALB）指標(biāo)。 結(jié)果：①與正常組相比，模型組大鼠體重明顯降低（P<0．05），肝、脾指數(shù)均明顯增加（P<0．05）；干預(yù)組大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù)與正常組相比無(wú)明顯變化（P>0．05），脾指數(shù)明顯增加（P<0．05）。與模型組相比，干預(yù)組大鼠體重明顯增加，肝、脾指數(shù)均明顯降低（P均<0．05）。②組織病理學(xué)觀察，HE染色及Masson染色示正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞無(wú)變性壞死。模型組大鼠肝小葉

7、結(jié)構(gòu)明顯破壞，纖維結(jié)締組織增生并向小葉內(nèi)延伸，假小葉形成，匯管區(qū)炎性浸潤(rùn)明顯。干預(yù)組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)輕度紊亂，匯管區(qū)僅見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)明顯假小葉形成。干預(yù)組肝內(nèi)炎癥活動(dòng)度分級(jí)及纖維化程度分期較模型組明顯改善（P<0．05）。③透射電鏡顯示干預(yù)組大鼠肝細(xì)胞損傷明顯減輕，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)尚清晰完整與正常組相似，肝竇及Disse腔內(nèi)膠原纖維沉積明顯減少。④干預(yù)組大鼠血清肝纖維化四項(xiàng)指標(biāo)（HA145．3±14．12ng/mL、LN97．8±7．2

8、2ng/mL、PCⅢ38．1±4．37 ng/mL和Ⅳ-C52．8±4．62 ng/mL）高于正常組（P均<0．05）；但與模型組（分別為HA178．9±20．46ng/mL、LN124．1±19．82 ng/mL、PCⅢ40．4±3．23 ng/mL、Ⅳ-C82．5±10．56 ng/mL）相比干預(yù)組血清肝纖維化四項(xiàng)均明顯降低（P<0．05，P<0．05， P>0．05， P<0．05）。⑤肝功能指標(biāo)：干預(yù)組血清ALT、AST和TBI

9、L與模型組相比明顯降低（P均<0．001），干預(yù)組血清ALB和正常組比較無(wú)差異（P=0．14），和模型組比較差異明顯（P<0．001）。⑥干預(yù)組血清TGF-β1含量較模型組明顯降低（P<0．001）。 結(jié)論： 1、PFD可顯著降低實(shí)驗(yàn)性肝纖維化大鼠血清HA、LN及Ⅳ-C水平，改善肝纖維化程度分期； 2、PFD能夠降低轉(zhuǎn)氨酶及膽紅素水平，降低肝臟炎癥活動(dòng)度分級(jí)，改善肝臟功能； 3、PFD對(duì)肝細(xì)胞有一定的形態(tài)