蒙藥復(fù)方配伍“訶子解草烏毒”的毒代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　研究“訶子解草烏毒”毒代動(dòng)力學(xué)原理。
　　方法：
　　(1)UPLC/Q Exactive MS法同時(shí)檢測(cè)家兔血漿中AC、HA、MA含量的建立。流動(dòng)相為甲醇-水(0.2％甲酸，0.015%三乙胺)=80：20；流速為0.4 mL·min-1；柱溫為25℃；進(jìn)樣量為5uL。家兔血漿用2%甘油甲醇溶液沉淀蛋白后進(jìn)樣分析。電噴霧離子化源(ESI)，掃描模式為Full MS/SIM，采集質(zhì)量范圍為600～650Da

2、，正離子檢測(cè)模式；一級(jí)質(zhì)譜分辨率為70000FWHM。選擇離子檢測(cè)(SIM)：m/z609.28(I.S.)，m/z632.31(MA)，m/z646.32(AC)，m/z616.31(HA)，駐留時(shí)間200ms；內(nèi)標(biāo)法峰面積定量。在此條件下進(jìn)行專屬性考察、線性范圍考察、精密度實(shí)驗(yàn)、回收率實(shí)驗(yàn)等一系列方法學(xué)實(shí)驗(yàn)。
　　(2)“訶子解草烏毒”的毒代動(dòng)力學(xué)研究。普通級(jí)健康成年雄性新西蘭兔15只，體重(3.0±0.2)kg，隨機(jī)分為3組

3、，即急性草烏中毒組、草烏-訶子（1:1）組、草烏-訶子（1:3）組。相同劑量草烏溶液灌胃給予三組家兔,灌胃后分別于指定的時(shí)間點(diǎn)（0.083，0.167，0.33，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0，6.0，9.0，12.0，24.0h）耳緣靜脈取血0.7mL，用UPLC/Q Exactive MS法檢測(cè)血漿中AC、HA、MA的濃度。
　　(3)計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，應(yīng)用DAS2.0程序計(jì)算tmax、Cmax、

4、tl/2、CLZ/F等毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并應(yīng)用SPSSl2.0進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果：
　　(1)建立了家兔血漿中AC、HA、MA同時(shí)測(cè)定的UPLC/Q Exactive MS法。三種生物堿在0.2-100ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量限為0.02ng/mL；三種生物堿的血漿萃取回收率與方法回收率高，日內(nèi)與日間精密度RSD均小于10%；常溫放置8h穩(wěn)定性，-20℃冷凍30天后穩(wěn)定

5、性以及經(jīng)歷3次冷凍-解凍循環(huán)穩(wěn)定性良好。
　　(2)三組家兔經(jīng)灌胃給藥后，AC、HA、MA在家兔體內(nèi)的血藥濃度-時(shí)間曲線均符合一室模型。急性草烏中毒組家兔血漿中AC、HA、MA在給藥后0.083h即可檢測(cè)到，分別于3.37±0.86h,6.4±0.51h,5.4±2.19h達(dá)到最大血藥濃度(Cmax)分別是15.814±4.2ng/mL,4.39±1.22ng/mL,13.10±3.24ng/mL，而在草烏-訶子(1:1)組，AC

6、、HA、MA分別在7.83±0.22h,5.4±0.19h,2.53±0.11h達(dá)到最大血藥濃度為11.65±2.68ng/mL,2.7±0.284ng/mL,7.48±0.99ng/mL(p<0.05)。同時(shí)在草烏-訶子(1:3)組，AC、HA、MA的血藥濃度分別為7.74±1.0ng/mL,2.62±0.62 ng/mL,7.21±2.69ng/mL，分別在4.37±0.77h,4.3±1.86h,3.5±0.80h。急性草烏中毒組

7、家兔生物堿的 t1/2分別為12.31±0.72h、5.40±1.45h、6.05±1.99h，相對(duì)于急性草烏中毒組,草烏-訶子（1:1，1:3）組家兔生物堿的t1/2分別為AC（14.81±2.37h，26.86±1.02h）、HA（10.76±0.73h，10.24±2.50h）、MA（8.51±1.74h，6.75±0.93h），顯著增加。在急性草烏中毒組，三種生物堿的 AUC0?t，MRT0-t分別是：AC(76.328±33.

8、38ng/L*h,10.06±1.51h)、HA（46.247±6.442ng/L*h，8.67±1.47h）、MA(136.727±26.13 ng/L*h，8.51±1.37h)，而草烏-訶子（1:1，1:3）組家兔生物堿的AUC0?t降低，MRT0-T分別顯著延長(zhǎng)(p<0.05)，MRT0-∞也表現(xiàn)出相似的趨勢(shì)，但延長(zhǎng)趨勢(shì)不明顯（p>0.05)。與草烏-訶子（1:1）組比較，草烏-訶子（1:3）組家兔三種生物堿的毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)有增

9、加或降低的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　(1)本實(shí)驗(yàn)建立的同時(shí)檢測(cè)家兔血漿中AC、HA、MA的UPLC/Q Exactive MS方法，靈敏度高、穩(wěn)定性好、測(cè)得數(shù)據(jù)可靠，適用于草烏的濃度監(jiān)控和毒代動(dòng)力學(xué)研究。
　　(2)訶子解草烏毒的毒代動(dòng)力學(xué)研究表明，訶子能顯著降低AC、HA、MA的最大血藥濃度（Cmax），t1/2顯著延長(zhǎng)，表明訶子能夠減緩三種生物堿的代謝速率，有一定的緩釋效果。即“訶子解草烏毒”這一蒙醫(yī)