環(huán)氧合酶-2在惡性黑素瘤發(fā)生中的作用及其分子機制研究.pdf

1、惡性黑素瘤是皮膚科常見的惡性腫瘤之一，它對傳統(tǒng)的化療和放療均不敏感，所以目前的治療主要是手術(shù)切除，并輔以免疫治療，但總體而言，治療效果尚不滿意，因此，探索新的靶向抗腫瘤藥物對于黑素瘤的治療和預(yù)防均有較大的意義。環(huán)氧合酶-2(COX-2)是炎癥過程中催化前列腺素類物質(zhì)合成的可誘導(dǎo)酶，近年的研究發(fā)現(xiàn)，包括肺癌、食管癌、膀胱癌、胃癌、直腸癌、乳腺癌、皮膚和頭頸部鱗癌在內(nèi)的許多種惡性腫瘤中都存在COX-2高表達并與腫瘤的侵襲生長密切相關(guān)。雖然C

2、OX-2導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的機制尚未完全明確，但COX-2確實在多種腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。然而迄今為止，有關(guān)COX-2在非上皮來源腫瘤，特別是惡性黑素瘤中的作用尚少見研究報道。為了解COX-2在惡性黑素瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其分子機制，本研究首先應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測了COX-2在皮內(nèi)痣和惡性黑素瘤組織中的表達，并對COX-2的表達與臨床、病理特征之間的關(guān)系進行了分析。此外，還采用免疫印跡方法對正常黑素細胞和三種惡性黑素

3、瘤細胞株COX-2的表達進行了檢測。為進一步了解COX-2抑制劑對于黑素瘤細胞的生物學(xué)作用，體外條件下，將COX-2抑制劑即非甾體類抗炎藥(NSAIDs)作用于具有不同COX-2表達水平的培養(yǎng)黑素瘤細胞株，并觀察細胞生物學(xué)特征的改變及一些凋亡相關(guān)分子的表達情況，以探討COX-2抑制劑誘導(dǎo)細胞凋亡作用的分子機制。該研究對COX-2在惡性黑素瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其分子機制進行了初步探討，有望為惡性黑素瘤的治療提供實驗依據(jù)。 第

4、一部分環(huán)氧合酶-2在惡性黑素瘤組織及細胞株中的表達及意義 本實驗采用免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡的方法，檢測了25例皮內(nèi)痣、45例惡性黑素瘤組織及正常黑素細胞、三株黑素瘤細胞中環(huán)氧合酶-2的表達情況，研究結(jié)果顯示，與正常黑素細胞及皮內(nèi)痣相比，惡性黑素瘤組織和細胞株中COX-2出現(xiàn)高表達，其高表達可能與黑素瘤的侵襲力、轉(zhuǎn)移性等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，與β-連環(huán)蛋白的表達也存在相關(guān)性，提示COX-2在惡性黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展中可能具有重

5、要的作用。為進一步驗證COX-2在惡性黑素瘤中的重要作用，并探討COX-2作為黑素瘤分子治療中的一種新型靶點的可行性，我們又對COX-2抑制劑對黑素瘤細胞的生物學(xué)作用及其分子機制進行了初步探討。 第二部分COX-2抑制劑對黑素瘤細胞的生物學(xué)作用及其分子機制的初步研究 本實驗采用MTT、流式細胞儀分析、形態(tài)學(xué)觀察、免疫印跡的試驗方法，觀察COX-2抑制劑作用于黑素瘤細胞后其生物學(xué)行為的改變，并探討其可能的作用機制，研究結(jié)果

6、顯示，COX-2抑制劑塞來昔布可通過誘導(dǎo)細胞凋亡及周期G1-S阻滯的方式抑制黑素瘤細胞的生長，它對黑素瘤細胞的生長抑制作用可能存在COX-2依賴和非依賴的途徑，塞來昔布對A375和Libr細胞的促凋亡作用可能與Caspase級聯(lián)激活中的重要分子啟動因子Caspase9和效應(yīng)因子Caspase3相關(guān)，而與抗凋亡蛋白分子Bcl-2及其家族成員Bax無關(guān)。 綜上所述，在本實驗中，首先應(yīng)用免疫組織化學(xué)和免疫印跡方法證實惡性黑素瘤組織和黑