酶膜反應(yīng)器水解大豆分離蛋白的研究.pdf

1、酶法制備具有生物活性的蛋白水解物及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用正受到越來(lái)越多的重視。傳統(tǒng)的蛋白酶水解方式是采用分批式，然而這種方式存在著很多的缺點(diǎn)。將超濾／納濾膜技術(shù)和水解反應(yīng)器結(jié)合起來(lái)，可以實(shí)現(xiàn)小分子量水解物從酶解產(chǎn)物中的連續(xù)分離，這一方法越來(lái)越受到重視。本文將對(duì)大豆分離蛋白在酶膜反應(yīng)器中水解進(jìn)行研究。 首先使用堿性蛋白酶Alcalase2.4L(EC3.4.21.62)和中性蛋白酶ProteaseN(IUB3.4.24.28)在間歇

2、式反應(yīng)器中水解大豆分離蛋白(SPI)并對(duì)其水解特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：ProteaseN具有較高的蛋白酶水解活力，最適作用溫度低并且穩(wěn)定性好，水解過(guò)程中易受產(chǎn)物抑制；兩種酶水解產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量均小于10,000，游離氨基酸含量較低；ProteaseN更適合用于酶膜反應(yīng)器中水解SPI，因此選擇ProteaseN作為后面酶膜反應(yīng)器的用酶。 為獲得酶膜反應(yīng)器中水解SPI的最佳工藝條件，以平均水分通量Javerage、蛋白質(zhì)回收率S

3、apparent以及透過(guò)液水解度DHpermeate為指標(biāo)，通過(guò)響應(yīng)面分析方法對(duì)初始水分通量Ji，初始蛋白質(zhì)濃度[S]和初始蛋白酶濃度[E]／[S】進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，三個(gè)因素對(duì)Javerage、Sapparent和DHpermeate的影響顯著，并存在顯著差異。經(jīng)優(yōu)化后的最優(yōu)工藝條件為：Ji為10mL／min，[S]為4％(w／v)，[E]／[S]為1.5％(w／w)，該條件下的Javerage、Sapparent和DHpermea

4、te分別達(dá)到71.20％、42.55％和32.35％。 為了證實(shí)酶膜反應(yīng)器的作用效果，對(duì)水解產(chǎn)物的理化性質(zhì)和功能性質(zhì)進(jìn)行了研究，并使用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行了靜態(tài)脫鹽和乙醇分級(jí)洗脫。結(jié)果表明：水解產(chǎn)物具有較好的溶解性和較低的粘度，同時(shí)具有較好的抗氧化活性。大孔吸附樹(shù)脂能將水解產(chǎn)物中的鹽分完全脫除，使用25％、50％、95％的乙醇溶液進(jìn)行靜態(tài)解吸，脫鹽率分別為90.72％、92.89％和93.29％，蛋白回收率分別為42.37％、28.