人類胰液蛋白質組學研究——研究方法、2-DE蛋白數(shù)據庫、圖譜表達規(guī)律及胰腺癌比較蛋白質組學分析.pdf

1、蛋白質組學是以細胞、組織或體液內全部蛋白質的存在及其活動方式為研究對象，研究其結構、功能、相互作用和修飾。將蛋白質組學應用于疾病研究，為尋找疾病分子標記和藥物靶標提供了新的方法和思路。胰腺癌是惡性程度最高預后最差的腫瘤之一，居我國腫瘤死因順位的6-8位(男性)和9-10位(女性)。提高早期診斷水平，實現(xiàn)早期診斷、早期治療是改善胰腺癌預后的關鍵。近年來應用蛋白質組學方法尋找腫瘤標志物成為醫(yī)學基礎研究的熱點。胰腺癌的蛋白質組學研究剛剛起步，

2、用雙向電泳的方法研究胰液蛋白質組學尚無報道。本課題以人類胰液為研究對象，以雙向電泳為技術平臺，探索胰液蛋白質組學研究的方法、胰液蛋白2-DE圖譜的表達規(guī)律、建立胰液蛋白的2-DE數(shù)據庫、并初步探索胰腺癌和胰腺良性疾病間比較蛋白質組學研究。 選擇有效的標本預處理方法是開展蛋白質組學研究的前提。根據胰液生理特點，胰液預處理要達到三個目的，脫鹽、蛋白濃縮、防止蛋白降解。本文比較了丙酮沉淀、PlusOne2-DClean-Upkit和超

3、濾離心三種預處理方法，證實超濾離心脫鹽充分，2-DE膠上蛋白點分離完全，是有效的胰液預處理方法。為防止蛋白降解我們采取低溫操作、加入高濃度蛋白酶抑制劑的方法，能夠有效抑制蛋白的降解。經過上述預處理后，胰液的2-DE圖譜具有良好的穩(wěn)定性。 本文選擇胰腺功能正常、胰管正常的膽囊結石患者的胰液標本進行2-DE膠上蛋白點的MALDI-TOF質譜分析，鑒定出80個蛋白點，代表了22種蛋白。大部分蛋白為蛋白酶，參與蛋白代謝過程、亞細胞定位位

4、于細胞外，符合外分泌消化液的生理特點。 為了進行胰液比較蛋白質組學研究，本文分析了胰液2-DE圖譜的表達規(guī)律。靜脈快速注射Secretin后收集的胰液標本，蛋白濃度隨時間延長逐漸下降，較早采集時間的胰液2-DE圖譜上蛋白質點多于較晚采集時間的圖譜，通過對4例患者圖譜—采集時間的分析，認為隨著時間延長，胰液中由于Secretin刺激分泌的蛋白比例增加，而蛋白的種類減少，因此應用比較蛋白質組學尋找腫瘤標志物的研究應該選用較早采集時間

5、段的胰液標本，以第一管或第二管為佳。 通過對16例患者的胰液標本進行2-DE分析，結合患者的臨床特點和MALDI-TOF鑒定結果，胰液2-DE圖譜分為3種類型：(1)胰液2-DE圖譜上各種蛋白酶和胰腺石蛋白表達完整，無明顯缺失，這些患者的ERCP表現(xiàn)為胰管無明顯狹窄或狹窄位于胰腺的體尾部。此類患者，其胰液的流量較大，胰液中蛋白的濃度較高。(2)胰液2-DE圖譜上各種蛋白酶和胰腺石蛋白大部分或全部缺失，這些患者的ERCP表現(xiàn)為胰頭

6、部或胰頸部胰管明顯狹窄或中斷。其胰液流量明顯減少，蛋白濃度低。(3)胰液2-DE圖譜上各種蛋白酶和胰腺石蛋白呈現(xiàn)中等程度的缺失，這些患者的ERCP表現(xiàn)為胰管頭部或頸部的中等程度狹窄。其胰液流量和蛋白濃度介于前兩種類型之間。 本文初步探討了胰液比較蛋白質組學研究的可行性。胰液2-DE圖譜上蛋白點的表達個體差異大，在應用2-DE方法尋找腫瘤生物過程引起的蛋白差異時，應在相同圖譜類型中比較疾病間的蛋白差異表達。 本研究是首次對