EphrinA2和EphA7在食管癌中的表達和意義.pdf

1、我國是食管癌高發(fā)國家，占全球病例數(shù)的一半。太行山區(qū)是我國的高發(fā)地區(qū)，包括河南林縣、河北磁縣、山西陽城等。環(huán)境和遺傳因素共同作用食管癌的演變。食管癌地區(qū)分布差異和高發(fā)區(qū)家族聚集現(xiàn)象提示遺傳因素起重要作用。
　　 Eph家族是目前已知最大的酪氨酸激酶受體，廣泛參與生物學(xué)事件的起始和調(diào)控。Eph和Ephrin在多種腫瘤高表達并促進腫瘤進展。EphrinA2是EphA家族的重要配體，在乳腺癌和肝癌的研究被報道。EphA7是EphrinA

2、2的受體，在肝癌、腸癌、胃癌的研究被報道。
　　 目的：
　　 研究EphrinA2和EphA7在食管癌組織mRNA和蛋白表達水平及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，進一步研究EphrinA2對食管癌細胞生長影響。
　　 材料與方法：
　　 1．研究對象的選取，組織標(biāo)本的采集及臨床資料的收集
　　 選取92例在林州市腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)且無放化療史的食管癌患者。采集標(biāo)本前向患者及家屬說明研究意義并獲得患者同意。

3、根據(jù)病歷收集患者臨床資料。
　　 2．組織樣本中EphrinA2和EphA7 mRNA表達水平的測定
　　 采用real-time PCR技術(shù)，以β-actin為內(nèi)參基因，檢測EphrinA2和EphA7 mRNA水平。
　　 3．檢測EphrinA2和EphA7在組織樣本的蛋白水平
　　 通過Western blot和免疫組化法檢測EphrinA2和EphA7蛋白水平。在200倍顯微鏡下觀察免疫組化切片

4、染色最強的3個視野，以胞漿棕黃色為陽性，癌組織與正常組織陽性細胞百分比的比值作為判斷食管癌蛋白表達水平指標(biāo)。
　　 4．檢測EphrinA2在食管癌細胞系的表達和影響
　　 采用Western blot技術(shù)檢測EphrinA2在8種人類食管鱗癌細胞系中的表達情況。檢測EphrinA2對KYSE-180細胞系的影響，繪制生長曲線。
　　 5．統(tǒng)計學(xué)分析
　　 采用SPSS12.0軟件，通過t檢驗比較Ephr

5、inA2和EphA7 mRNA水平，通過x2檢驗比較EphrinA2和EphA7 mRNA和蛋白水平與臨床病理參數(shù)關(guān)系。檢驗水準(zhǔn)α=0.05
　　 結(jié)果：
　　 1食管癌組織的熒光定量PCR結(jié)果
　　 1.1食管癌組織中EphrinA2和EphA7 mRNA水平
　　 EphrinA2和EphA7 mRNA水平分別在59.8％(55/92)和73.9％(68/92)的癌組織上調(diào)。癌組織EphrinA2和E

6、phA7mRNA水平均顯著高于正常組織(t=5.695，P＜0.05；t=7.179，P＜0.05)。兩基因mRNA水平顯著正相關(guān)（r=0.283，P＜0.05）。
　　 1.2食管癌組織中EphrinA2和EphA7mRNA水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 EphrinA2mRNA在不同病理類型差異顯著(x2=6.463，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=6.800，P＜0.05)，在腫瘤家族史組顯著

7、高于無腫瘤家族史組(x2=6.049，P＜0.05)。EphA7 mRNA在60歲以上組顯著高于60歲以下組(x2=6.506，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=11.272，P＜0.05)。
　　 2．食管癌組織的免疫組化和Western blot結(jié)果
　　 2.1食管癌組織中EphrinA2和EphA7蛋白水平
　　 免疫組化和Western Blot結(jié)果顯示癌組織EphrinA2和Eph

8、A7蛋白水平高于正常組織。
　　 2.2 EphrinA2和EphA7蛋白水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 EphrinA2蛋白水平在腫瘤家族史組顯著高于無腫瘤家族史組(x2=4.304，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=4.608，P＜0.05)。EphA7蛋白水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=4.800，P＜0.05)。
　　 3．檢測EphrinA2在人類食管鱗癌細胞系的表達情況和

9、對細胞系的生長影響
　　 Western blot結(jié)果顯示EphrinA2在KYSE-180細胞表達最低。MTT比色法顯示KYSE-180細胞系的吸光度每天都有EphrinA2H＞EphrinA2L＞空載細胞。
　　 結(jié)論：
　　 1．EphrinA2和EphA7 mRNA和蛋白在食管癌組織較正常組織表達上調(diào)。EphrinA2和EphA7 mRNA水平正相關(guān)，可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。
　　 2.