硒、鉬、硼對氟中毒大鼠氟代謝及其成釉細胞生物學特性影響的實驗研究.pdf

1、目的：對飲用氟化鈉水大鼠飼以不同濃度亞硒酸鈉，鉬酸銨，四硼酸鈉飼料，觀察大鼠的各項指標變化，以探討硒、鉬、硼與氟的相互作用，尋找對氟中毒有較好拮抗作用的微量元素。
　　 方法：本實驗包括兩個部分
　　 實驗一：硒、鉬、硼對氟中毒大鼠氟代謝的影響
　　 1、動物的選擇、分組及飼養(yǎng)：64只wistar大鼠，隨機分成8組，每組8只，雌雄各半，分籠人工喂養(yǎng)（含氟水和含硒鉬硼的飼料由人工定量喂養(yǎng)，不足的由蒸餾水和常規(guī)飼料補

2、足）。對照組正常飲水飲食，實驗組（硒、鉬、硼、氟組）飲用含氟（F￣）45mg/L的蒸餾水，另外，硒、鉬、硼組分別在飼料中加入硒0.3mg/kg、硒1.5mg/kg、鉬55mg/kg、鉬82.2mg/kg、硼45mg/kg、硼55mg/kg，喂養(yǎng)16周。
　　 2、觀察指標及方法
　　 （1）實驗起始時和每周末記錄體重，觀察大鼠一般情況。
　　 （2）每隔四周收集大鼠24h尿樣，用氟離子電極選擇法和羥脯氨酸試劑盒分

3、別檢測尿氟和羥脯氨酸的含量。
　　 （3）每隔四周觀察大鼠氟牙癥患病情況，根據(jù)氟牙癥分級標準對各組大鼠氟牙癥進行記分。
　　 （4）16周末斷頭處死大鼠，取包括下切牙的部分下頜骨固定，脫鈣，切片。
　　 實驗二硒、鉬、硼對氟中毒大鼠成釉細胞形態(tài)學及PCNA、C-myc表達變化的影響
　　 1、利用光鏡和透射電鏡觀察成釉細胞的形態(tài)變化及細胞器的改變。
　　 2、利用原位末端細胞凋亡檢測（TdT-me

4、djated-dUTP nicked end labeling，TUNEL）技術觀察成釉細胞凋亡的發(fā)生，并且通過免疫組織化學檢測技術，觀察大鼠切牙釉質發(fā)生過程中成釉細胞中調控基因增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen，PCNA）、原癌基因c-myc的表達。采用圖像分析軟件對免疫組化染色結果進行半定量分析。
　　 結果：
　　 1、隨實驗時間延長，各組體重逐漸增加，硒組高于鉬組和

5、硼組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。尿氟濃度升高。16周末，氟組尿氟濃度降低，與硒組、鉬組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 2、氟牙癥情況：各組在四周末均出現(xiàn)氟牙癥，隨染氟時間延長出現(xiàn)中度氟牙癥，未出現(xiàn)重度氟牙癥。實驗結束時，硒組有三例無氟牙癥，與硼組、鉬組、氟組比較有意義（p<0.05）。鉬組及硼組氟牙癥癥狀輕于氟組。
　　 3、尿羥脯氨酸情況：16周時，硒組含量低于氟組、鉬組、硼組，比較有差異（p<

6、0.05）。
　　 4、HE染色結果：對照組大鼠成釉細胞成高柱狀，排列均勻一致。氟組成秞細胞排列極不規(guī)則，大量細胞扭曲，釉質變薄。硒、鉬、硼組介于兩者之間。
　　 5、TEM結果：實驗組成秞細胞出現(xiàn)了細胞器的減少，細胞膜、線粒體、粗面內質網及核膜受到不同程度的損傷。
　　 6、細胞凋亡、PCNA、C-myc表達的影響：實驗組細胞凋亡抑制，C-myc的表達減弱，PCNA表達增強，以硒組明顯。
　　 結論：<