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文檔簡介
1、研究背景:
淋巴瘤是一組起源于淋巴結(jié)或結(jié)外淋巴組織的惡性腫瘤,可分為霍奇金淋巴瘤(HLs)及非霍奇金淋巴瘤(NHLs)。隨著診斷及治療手段的發(fā)展,淋巴瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤的預(yù)后得到了一定改善,但仍有部分患者在治療中出現(xiàn)進(jìn)展或因復(fù)發(fā)而死亡。近年來,研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophage,TAM)在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。TAM廣泛浸潤與典型霍奇金淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、粘
2、膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤、血管免疫母細(xì)胞T細(xì)胞淋巴瘤等多種淋巴瘤的不良預(yù)后相關(guān)。因此探討淋巴瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的外周血單核細(xì)胞與TAM的轉(zhuǎn)化效應(yīng)及TAM對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用,可為淋巴瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者風(fēng)險(xiǎn)分層提供依據(jù),并為新型治療手段的研發(fā)提供方向及靶點(diǎn)。
研究目的:
1、探討淋巴瘤及骨髓瘤患者的TAM體外轉(zhuǎn)化過程?;颊吲c健康人之間有無差異;患者TAM轉(zhuǎn)化效應(yīng)與疾病臨床特征是否相關(guān)。
2、探
3、討體外條件下,患者TAM對(duì)PTCL(peripheral T-cell lymphoma)腫瘤細(xì)胞生長的作用。
研究方法:
1、單核細(xì)胞系THP-1與PTCL腫瘤細(xì)胞株(HUT-78)共培養(yǎng),經(jīng)流式細(xì)胞分析測定單核細(xì)胞表型變化,同時(shí)計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞,觀察腫瘤生長情況,經(jīng)SPSS.20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,為建立外周血單核細(xì)胞TAM轉(zhuǎn)化模型摸索條件。
2、使用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法提
4、取初治淋巴瘤、骨髓瘤患者及健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞,經(jīng)CD14免疫磁珠分選獲得純化單核細(xì)胞,與HUT-78共培養(yǎng),經(jīng)流式細(xì)胞分析測定單核細(xì)胞表型變化,同時(shí)計(jì)數(shù)HUT-78腫瘤細(xì)胞,觀察腫瘤生長情況,最后經(jīng)SPSS.20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
研究結(jié)果:
1、THP-1及HUT-78以1×105cells/ml密度共培養(yǎng)72小時(shí)后,THP-1單核細(xì)胞樣本中CD68(+)、CD163(+)、CD68&CD163(+)
5、細(xì)胞所占比例明顯增高(p值分別為0.00004、0.005181、0.001804);上述細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度無明顯變化。
2、THP-1及HUT-78以1×105cells/ml密度培養(yǎng)時(shí),不同時(shí)間點(diǎn),相對(duì)各單獨(dú)培養(yǎng)組細(xì)胞計(jì)數(shù)之和,THP-1與HUT-78共培養(yǎng)組細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增多(p=0.010989)。
3、患者單核細(xì)胞樣本中,CD68(+)、CD163(+)、CD68&CD163(+)細(xì)胞比例在共培養(yǎng)后顯著
6、增加(p值分別為0.000078、0.018981、0.012987);CD163(+)細(xì)胞、CD163&CD68(+)細(xì)胞中CD163成分的平均熒光強(qiáng)度,于共培養(yǎng)后亦顯著增加(p值分為0.049950、0.017414)。健康人單核細(xì)胞樣本中,上述細(xì)胞比例及平均熒光強(qiáng)度在共培養(yǎng)前后無明顯變化。相對(duì)健康對(duì)照組而言,患者組單核細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后,單核細(xì)胞樣本中CD68(+)、CD68&CD163(+)細(xì)胞比例增加更明顯(p值分別為0.
7、017982、0.045954);患者組及健康對(duì)照組單核細(xì)胞在平均熒光強(qiáng)度表達(dá)上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
4、患者組中,于不同時(shí)間點(diǎn)觀察到共培養(yǎng)組HUT-78計(jì)數(shù)多于各單獨(dú)培養(yǎng)組之和,其中三名患者的計(jì)數(shù)差值存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值分別為0.046581、0.041563、0.007960)。健康對(duì)照組中未觀察到上述現(xiàn)象?;颊呓M與健康對(duì)照組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
5、患者單核細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后,單核細(xì)胞樣本中CD6
8、8&CD163(+)細(xì)胞比例增多與骨髓浸潤相關(guān)。
研究結(jié)論:
1、THP-1與PTCL細(xì)胞共培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)化為TAM,TAM可促進(jìn)PTCL細(xì)胞生長。
2、體外條件下,人外周血單核細(xì)胞與PTCL細(xì)胞共培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)化為TAM,TAM對(duì)PTCL細(xì)胞生長起一定促進(jìn)作用。
3、發(fā)現(xiàn)淋巴瘤或骨髓瘤患者單核細(xì)胞TAM轉(zhuǎn)化能力強(qiáng)于健康人的現(xiàn)象。
4、與PTCL細(xì)胞共培養(yǎng)后,患者單核細(xì)胞樣本
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