腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)與淋巴瘤細(xì)胞相互作用的研究.pdf

1、研究背景：
　　 淋巴瘤是一組起源于淋巴結(jié)或結(jié)外淋巴組織的惡性腫瘤，可分為霍奇金淋巴瘤(HLs)及非霍奇金淋巴瘤(NHLs)。隨著診斷及治療手段的發(fā)展，淋巴瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤的預(yù)后得到了一定改善，但仍有部分患者在治療中出現(xiàn)進(jìn)展或因復(fù)發(fā)而死亡。近年來，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophage，TAM）在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。TAM廣泛浸潤與典型霍奇金淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、粘

2、膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤、血管免疫母細(xì)胞T細(xì)胞淋巴瘤等多種淋巴瘤的不良預(yù)后相關(guān)。因此探討淋巴瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的外周血單核細(xì)胞與TAM的轉(zhuǎn)化效應(yīng)及TAM對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用，可為淋巴瘤等血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者風(fēng)險(xiǎn)分層提供依據(jù)，并為新型治療手段的研發(fā)提供方向及靶點(diǎn)。
　　 研究目的：
　　 1、探討淋巴瘤及骨髓瘤患者的TAM體外轉(zhuǎn)化過程?；颊吲c健康人之間有無差異；患者TAM轉(zhuǎn)化效應(yīng)與疾病臨床特征是否相關(guān)。
　　 2、探

3、討體外條件下，患者TAM對(duì)PTCL(peripheral T-cell lymphoma)腫瘤細(xì)胞生長的作用。
　　 研究方法：
　　 1、單核細(xì)胞系THP-1與PTCL腫瘤細(xì)胞株(HUT-78)共培養(yǎng)，經(jīng)流式細(xì)胞分析測定單核細(xì)胞表型變化，同時(shí)計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞，觀察腫瘤生長情況，經(jīng)SPSS.20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，為建立外周血單核細(xì)胞TAM轉(zhuǎn)化模型摸索條件。
　　 2、使用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法提

4、取初治淋巴瘤、骨髓瘤患者及健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)CD14免疫磁珠分選獲得純化單核細(xì)胞，與HUT-78共培養(yǎng)，經(jīng)流式細(xì)胞分析測定單核細(xì)胞表型變化，同時(shí)計(jì)數(shù)HUT-78腫瘤細(xì)胞，觀察腫瘤生長情況，最后經(jīng)SPSS.20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　 研究結(jié)果：
　　 1、THP-1及HUT-78以1×105cells/ml密度共培養(yǎng)72小時(shí)后，THP-1單核細(xì)胞樣本中CD68(＋)、CD163(＋)、CD68&CD163(＋)

5、細(xì)胞所占比例明顯增高(p值分別為0.00004、0.005181、0.001804)；上述細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度無明顯變化。
　　 2、THP-1及HUT-78以1×105cells/ml密度培養(yǎng)時(shí)，不同時(shí)間點(diǎn)，相對(duì)各單獨(dú)培養(yǎng)組細(xì)胞計(jì)數(shù)之和，THP-1與HUT-78共培養(yǎng)組細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增多(p=0.010989)。
　　 3、患者單核細(xì)胞樣本中，CD68(＋)、CD163(＋)、CD68&CD163(＋)細(xì)胞比例在共培養(yǎng)后顯著

6、增加（p值分別為0.000078、0.018981、0.012987）；CD163(＋)細(xì)胞、CD163&CD68(＋)細(xì)胞中CD163成分的平均熒光強(qiáng)度，于共培養(yǎng)后亦顯著增加（p值分為0.049950、0.017414）。健康人單核細(xì)胞樣本中，上述細(xì)胞比例及平均熒光強(qiáng)度在共培養(yǎng)前后無明顯變化。相對(duì)健康對(duì)照組而言，患者組單核細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后，單核細(xì)胞樣本中CD68(＋)、CD68&CD163(＋)細(xì)胞比例增加更明顯（p值分別為0.

7、017982、0.045954）；患者組及健康對(duì)照組單核細(xì)胞在平均熒光強(qiáng)度表達(dá)上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4、患者組中，于不同時(shí)間點(diǎn)觀察到共培養(yǎng)組HUT-78計(jì)數(shù)多于各單獨(dú)培養(yǎng)組之和，其中三名患者的計(jì)數(shù)差值存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值分別為0.046581、0.041563、0.007960)。健康對(duì)照組中未觀察到上述現(xiàn)象?；颊呓M與健康對(duì)照組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、患者單核細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后，單核細(xì)胞樣本中CD6

8、8&CD163(＋)細(xì)胞比例增多與骨髓浸潤相關(guān)。
　　 研究結(jié)論：
　　 1、THP-1與PTCL細(xì)胞共培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)化為TAM，TAM可促進(jìn)PTCL細(xì)胞生長。
　　 2、體外條件下，人外周血單核細(xì)胞與PTCL細(xì)胞共培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)化為TAM，TAM對(duì)PTCL細(xì)胞生長起一定促進(jìn)作用。
　　 3、發(fā)現(xiàn)淋巴瘤或骨髓瘤患者單核細(xì)胞TAM轉(zhuǎn)化能力強(qiáng)于健康人的現(xiàn)象。
　　 4、與PTCL細(xì)胞共培養(yǎng)后，患者單核細(xì)胞樣本