一中國BPES家系的基因突變分析.pdf

1、迄今為止臨床尚無有效的方法可以治療BPES Ⅰ型女性患者的不孕癥。雖然應(yīng)用外科整形手術(shù)可以矯正BPES患者的眼部及顏面部畸形，從而改善其外觀，但是BPES患者一般視力都受影響，有些還合并有全身其他系統(tǒng)不同程度的疾病，使患者及其家庭承受著軀體、精神及經(jīng)濟(jì)上的多重痛苦。另外，該病患者的臨床表型變異性較大，給臨床診斷也帶來一定困難，根據(jù)孟德爾遺傳規(guī)律，本病患者下一代再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)率為50％，故對(duì)：BPES患者進(jìn)行遺傳咨詢尤為重要。目前產(chǎn)前診斷的方法

2、有細(xì)胞遺傳學(xué)檢查及基因分析。患者染色體核型不正常者，妊娠后可做細(xì)胞遺傳學(xué)檢查進(jìn)行排查。但對(duì)核型正常者，只能通過基因分析做產(chǎn)前診斷。因此，應(yīng)用遺傳學(xué)方法對(duì)BPES致病基因FOXL2突變類型的檢測(cè)是對(duì)該病進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷的基礎(chǔ)。 目的 對(duì)一個(gè)來自中國連續(xù)傳遞5代的Ⅰ型BPES大家系中的患者進(jìn)行FOXL2基因突變研究，尋找其突變位點(diǎn)。為進(jìn)一步的遺傳咨詢提供指導(dǎo)和理論依據(jù)。 方法 1．抽取該家系中患病個(gè)體Ⅳ8及Ⅲ

3、3的外周靜脈血進(jìn)行染色體核型分析。檢測(cè)該家系中患者是否存在染色體缺失。 2．采用經(jīng)典鹽析法提取該家系中患者及來我院健康體檢的正常人外周血基因組DNA，并進(jìn)行DNA純化和定量。 3．根據(jù)參考文獻(xiàn)設(shè)計(jì)4對(duì)引物，來對(duì)FOXL2基因的編碼區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 4．對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序，檢測(cè)是否存在突變及突變位點(diǎn)。 5．聚丙烯酰胺電泳進(jìn)一步驗(yàn)證直接測(cè)序的結(jié)果。 結(jié)果 1．家系分析結(jié)果表明該BPES家

4、系的遺傳方式為常染色體顯性遺傳，并且此家系為BPES Ⅰ型。 2．染色體檢測(cè)顯示該家系中患者Ⅳ8及Ⅲ3分別為正常男性染色體核型：46，XY和正常女性染色體核型：46，XX。 3．直接測(cè)序顯示，該家系中患病個(gè)體的FOXL2基因存在1080-1096dup17突變。 4．聚丙烯酰胺電泳驗(yàn)證結(jié)果顯示該家系中患者的在FOXL2基因的CD和EF區(qū)域?yàn)殡s合子。 結(jié)論 1．正常個(gè)體的FOXL2全基因序列與Gen

5、Bank數(shù)據(jù)庫相符，而BPES家系患者的FOXL2基因引物CD PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果顯示該患者存在1080-1096dup17這一重復(fù)突變。從而導(dǎo)致該家系中患病個(gè)體呈現(xiàn)出BPES Ⅰ型的表型。 2．該BPES 1型家系中發(fā)現(xiàn)的1080-1096dup17重復(fù)突變，引起讀碼框第287位密碼子之后發(fā)生移碼，從而導(dǎo)致編碼蛋白質(zhì)在第361位密碼子處提前終止。這個(gè)突變雖然未影響FOXL2基因的forkhead區(qū)域和多聚丙氨酸區(qū)域的完整性，但將