末端修飾的PAMAM非病毒基因治療載體的研究.pdf

1、在基因治療的過(guò)程中,基因載體有著極其重要的作用.對(duì)于常用的陽(yáng)離子聚合物/質(zhì)粒DNA非病毒基因治療載體來(lái)講,其與質(zhì)粒DNA之間的相互作用包括靜電,疏水等.而在基因傳遞的過(guò)程中,疏水作用究竟起一個(gè)什么樣的作用是一個(gè)受到重視的問(wèn)題.本文研究的主要內(nèi)容有: 首先,本文參考文獻(xiàn),在液相中對(duì)PAMAM(polyamidoamine)進(jìn)行了表面修飾,為了體現(xiàn)疏水性的作用,我們選擇了帶有苯環(huán)的苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)作為表面修飾物.

2、核磁共振檢測(cè)證明了PAMAM表面連接了足夠的氨基酸殘基,生成了表面既有氨基(在水溶液中會(huì)帶正電荷)又有大量疏水基的PAMAM氨基酸修飾物. 采用了質(zhì)粒提取試劑盒,色譜法和聚乙二醇法提取了得到實(shí)驗(yàn)所需的質(zhì)粒,并利用電泳和紫外吸收來(lái)檢測(cè)了質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度,使之能夠用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn). 為了考查新聚合物和質(zhì)粒形成的復(fù)合物的自聚過(guò)程,瓊脂糖凝膠電泳,溴乙錠熒光發(fā)射,多角度激光散射和透射電鏡從不同的方面顯示了聚合物和質(zhì)粒DNA之間的作

3、用和質(zhì)粒的縮合. 聚合物對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)和轉(zhuǎn)染效率實(shí)驗(yàn)反應(yīng)了新聚合物的生物毒性和最終的轉(zhuǎn)染效率.在低的濃度下,聚合物有相對(duì)較弱的毒性,在電荷比例為5的時(shí)候,修飾Phe和Trp的聚合物能夠大大提高綠色熒光蛋白在非洲綠猿腎細(xì)胞中的表達(dá)效率. 最終說(shuō)明,含疏水基的氨基酸在PAMAM表面的引入,改變了PAMAM和質(zhì)粒DNA之間的自聚過(guò)程,并最終提高了細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率,說(shuō)明了疏水作用在基因傳遞系統(tǒng)中的重要作用,為陽(yáng)離子聚合物基