京尼平的微生物制備及其作為交聯(lián)劑的應用研究.pdf

1、梔子是茜草科(Rubiaceae)梔子屬(Gardenia)植物，是一味常用中藥，具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等作用。據(jù)梔子中主要藥理藥效成分的研究報道：梔子中起主要藥效作用的主要成分是梔子苷元一京尼平。但是京尼平在梔子史的盒量很低，約為0.005％～0.01％，主要是以其前體形式一一京尼平苷形式存在，含量約為3％～5％。因此如何提高京尼平的含量成為當今乃至今后研究的重點。 在文獻報道中提高梔子中京尼平含量的方法主要有酶解法

2、，但其存在一些缺陷，如酶以及京尼平苷價格昂貴等，未能應用于實際生產(chǎn)。本論文通過微生物發(fā)酵法實現(xiàn)對京尼平苷的轉化，無需將酶及京尼平苷提純，因此有效的避免了上述方法存在的缺陷。 京尼平的不僅具有重要的藥效作用，還可以作為一種新型的生物材料交聯(lián)劑。它不僅能形成穩(wěn)定的交聯(lián)制品，還具有細胞毒性小，生物相容性好，抗降解能力強和應用領域廣泛等優(yōu)點，是非常有前途的交聯(lián)劑。 本研究的主要研究內容以及結果如下： Ⅰ、轉化京尼平苷的菌

3、種篩選：篩選、分離具有轉化京尼平苷為京尼平的高轉化菌株，并對菌種進行鑒定。以梔子果粉為碳源建立的篩選模型，分離到具有轉化京尼平苷為京尼平的β-葡萄糖苷酶高產(chǎn)菌株。經(jīng)過對發(fā)酵產(chǎn)物TLC和HPLC分析，得到一株優(yōu)良菌株GP-4，此菌株具轉化專一性、高效性。 Ⅱ、微生物發(fā)酵梔子條件的優(yōu)化：優(yōu)化發(fā)酵工藝，得到最佳轉化參數(shù)，提高生產(chǎn)菌種的轉化水平，獲得更多的目的產(chǎn)物。以轉化后京尼平含量為指標，分別從對發(fā)酵溫度、底物濃度、裝液量、轉速、轉化

4、時間等幾方面進行望因素實驗，叢而確定京尼平苷轉化的最佳條件，使京尼平苷最大程度的轉，化為京尼平。實驗結果是：將使用玉米糖化液培養(yǎng)得到的菌種，洗滌后接入到京尼平苷濃度為1.5％、(NH<,4>)<,2>SO<,4> 0.1％、MgSO<,4> 0.1％、KH<,2>PO<,4> 0.2％、pH自然的轉化培養(yǎng)基中，轉速150 rpm、裝液量40％、溫度28℃、轉化時間30小時。經(jīng)此條件京尼平苷轉化率最高，可達到98％以上。 Ⅲ、微生

5、物發(fā)酵梔子的動力學研究：通過對發(fā)酵過程中碳源、氮源、菌體量、β-葡萄糖苷酶酶活、京尼平苷以及京尼平含量的變化，探討發(fā)酵過程中影響京尼平苷轉化為京尼平的主要因素及其動力學的基本特征。進而為發(fā)酵過程的參數(shù)控制和發(fā)酵規(guī)模的擴大提供重要的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)。 Ⅳ、京尼平的分離提取及其結構鑒定：建立分離純化京尼平的工藝路線，并對分離產(chǎn)物進行結構鑒定。篩選出D141和HPD300的混合樹脂用于京尼平的吸附，并通過一系列的系統(tǒng)行為調控試驗，最終得

6、到了京尼平的最佳提取工藝：京尼平濃度為2mg/ml，加入NaCl 5％，并調pH為4，以4.8BV/h的速度通過D141：HPD100=8：5的混合大孔吸附樹脂，到達泄漏點時停止上樣，然后用丙酮：乙醇=1：1的洗脫劑洗脫至無京尼平檢出為止。通過大孔吸附樹脂結合硅膠柱層析分離法分離出京尼平結晶純度為95％以上。經(jīng)HPLC、UV、IR、HNMR鑒定分離白色針狀結晶為京尼平。 Ⅴ、京尼平作為交聯(lián)劑的應用研究：通過測定不同交聯(lián)條件制各的