肌腱組織的深低溫保存研究.pdf

1、前言： 選用新型冷凍保護試劑配方(CryoprotectiveAgent CPA)對肌腱組織進行玻璃化冷凍保存研究，考察不同冷凍保存方法對肌腱細胞細胞形態(tài)、組織結構及生物力學性能影響的影響，研究不同時段自體及異體移植肌腱大體及組織形態(tài)學差異，探討玻璃化冷凍保存肌腱作為異體移植材料的可行性。 方法： 1、按預試驗篩選出來的玻璃化保護劑保存肌腱，在液氮中保存2周以上，做為玻璃化組?！皟刹椒ā鄙畹蜏乩鋬霰４婕‰?，程控降

2、溫儀控制逐步降溫致-50℃，維持40分鐘后投入液氮，冷凍保存2周以上，做為”兩步法”深低溫組，新鮮肌腱取材后4小時內完成體外檢測，做為新鮮肌腱組。電鏡觀察不同組間肌腱組織形態(tài)學差異，Instron-5865力學材料試驗機測試不同組間肌腱生物力學差異。 2、術后2周、4周、8周無菌條件下取出植入的玻璃化保存肌腱，行HE染色及MSSON三色染色，觀察肌腱愈合情況，并與相對應的不同移植時期自體肌腱及“兩步法”深低溫冷凍保存肌腱進行比較

3、。 結果： 1、電鏡觀察結果顯示：玻璃化保存法對肌腱細胞和膠原纖維結構損傷輕微，而“兩步法”深低溫冷凍保存法則對肌腱細胞和膠原纖維結構損傷較重，尤其以肌腱細胞為重； 2、生物力學檢測結果顯示：肌腱破壞荷載峰值：新鮮肌腱組與玻璃化保存組及”兩步法”深低溫冷凍保存組均有顯著差異(F=9.222，p=0.002)，玻璃化保存組與”兩步法”深低溫冷凍保存組無顯著差異(p=0.256)；最大載荷拉伸位移：新鮮肌腱組與玻璃化

4、保存組及”兩步法”深低溫冷凍保存組三組間均無顯著差異(F=3.288，p=0.065)；楊氏彈性模量：新鮮肌腱組與玻璃化保存組及“兩步法”深低溫冷凍保存組均有顯著差異(F=7.368，p=0.006)，玻璃化保存組與”兩步法"深低溫冷凍保存組無顯著性差異(p=0.577)。 3、不同時段肌腱移植試驗結果顯示：新鮮自體肌腱移植后2周時，肌腱細胞明顯減少，吻合口部可見炎癥細胞浸潤，吻合口內有較多血管長入，4周時肌腱細胞基本消失，粗大

5、膠原被細膠原取代，細膠原纖維趨向于連接成束，吻合口部粘連較重，8周時部分細膠原纖維連結成束，由四周向中心逐漸替代細膠原纖維，移植肌腱內血管逐漸減少消失，新的纖維排列稍欠規(guī)整。玻璃化異體肌腱吻合口部的愈合與膠原的替代進程較慢，局部粘連也稍重，替代后的膠原纖維排列也較自體組欠規(guī)整?！皟刹椒ā鄙畹蜏乩鋬黾‰斓奶娲^程較新鮮肌腱組與玻璃化組更慢，局部粘連也更重，替代后的膠原結構也更差。通過三組肌腱移植后愈合進程的動態(tài)觀察，可以看出新鮮自體肌腱移

6、植效果優(yōu)于玻璃化異體肌腱，而玻璃化異體肌腱又優(yōu)于”兩步法”深低溫冷凍異體肌腱。 結論： 玻璃化法保存的肌腱具有良好的細胞結構和組織形態(tài)，體外檢測力學性能結果顯示，玻璃化法保存的肌腱比正常肌腱稍差，比“兩步法”深低溫保存肌腱稍好，但無統(tǒng)計學意義。將自體肌腱、玻璃化保存肌腱、“兩步法”深低溫冷凍保存肌腱進行體內移植，發(fā)現(xiàn)自體肌腱、玻璃化肌腱與“兩步法”深低溫保存肌腱均存在不同程度炎癥反應，但不影響肌腱的愈合與重建，玻璃化法可