肺癌中CYP2J2基因啟動子區(qū)異常高甲基化.pdf

1、肺癌是世界上最常見的癌癥死亡原因之一。盡管近年來在診斷技術(shù)和治療方法上均有很大的提高，但是肺癌的預后仍然不佳，原因是三分之二以上的病人在確診時已經(jīng)發(fā)生了微小轉(zhuǎn)移。因此，探索有效的早期診斷肺癌的方法，爭取在外科手術(shù)治愈前盡早診斷是當務之急。一種行之有效的方法是，找到肺癌特異性分子標記物，尤其是在最早期階段就能檢測到的與肺癌發(fā)生和進展相關(guān)的特異性標記物。迄今為止，傳統(tǒng)的放射線及痰液細胞學檢查對長期吸煙者進行早期篩查并沒有降低肺癌死亡率。

2、r>　　 表觀遺傳學是推動腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素之一，而甲基化是最常見的表觀遺傳改變。近年來的研究表明，基因甲基化是許多類型腫瘤，包括肺癌，發(fā)生發(fā)展中的早期事件。肺癌中多種基因頻繁地發(fā)生甲基化，包括腫瘤抑制基因P16、DNA修復基因MGMT、粘附分子E-cadherin及RARβ等與腫瘤相關(guān)的基因。與遺傳學改變不同的是，表觀遺傳學改變是一種可逆的過程，特異性DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-dc能使基因去甲基化而激活沉默的基因。

3、r>　　 CYP2J2基因在腫癌（包括肺癌）的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。目前，很多研究集中在CYP2J2對病理生理作用上，如CYP2J2在腫瘤、心血管疾病及藥物和異物代謝方面的作用，而表達調(diào)控面的研究尚未見報道。闡明表達調(diào)控的機制，有利于腫瘤CYP2J2基因的早期診斷及靶向治療，因此，對其表達調(diào)控的機制進行深入研究非常有必要。遺傳學和表觀遺傳學在調(diào)節(jié)基因表達方面均起著至關(guān)重要的作用，本研究從表觀遺傳學角度，研究DNA甲基化在CYP

4、2J2基因表達調(diào)控中的作用同時，對CYP2J2基因甲基化在肺癌中的臨床意義進行了探討。發(fā)現(xiàn)CYP2J2基因在肺癌中處于高甲基化，證實了CYP2J2甲基化能部分調(diào)節(jié)肺癌細胞中CYP2J2基因的表達，明確了CYP2J2基因甲基化水平與性別有關(guān)，更有趣的是CYP2J2基因甲基化與非小細胞肺癌患者預后有關(guān)。
　　 首先，用MSP方法檢測了三種肺癌細胞（A549、NCI-H446和NCI-H460）中CYP2J2基因甲基化狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)三種肺

5、癌細胞中CYP2J2基因啟動子區(qū)均發(fā)生了甲基化。接著，用去甲基化藥物5-Aza-dC干預上述三種肺癌細胞系，用real-time PCR及MSP方法檢測干預前后CYP2J2 mRNA表達和啟動子區(qū)甲基化變化。結(jié)果顯示：A549和NCI-H460細胞CYP2J2 mRNA表達量較處理前增多，而NCI-H446細胞的表達量無明顯改變；而A549和NCI-H460細胞甲基化M帶密度較處理前變淺，U帶密度較處理前增強，NCI-H446細胞甲基化

6、在處理前后無明顯的改變。這些結(jié)果表明，CYP2J2基因甲基化部分調(diào)節(jié)其表達。
　　 為了進一步研究在體腫瘤CYP2J2基因甲基化情況，用MSP方法檢測了56對肺癌組織和癌旁正常組織，及10例非腫瘤患者正常肺組織中CYP2J2基因甲基化。結(jié)果顯示，56例肺癌中，44例（78.6％）完全甲基化; 7例（12.5％）部分甲基化，5例（8.9％）未甲基化； 56例配對癌旁正常肺組織中28例（50％）完全甲基化，10例（17.9％）部分甲

7、基化，18例（32.1％）未甲基化；而在10例非腫瘤患者肺組織中無一例甲基化。癌旁正常組織中檢測到甲基化，提示1、甲基化發(fā)生在腫瘤發(fā)生的早期階段；2、甲基化的發(fā)生早于病理形態(tài)的改變；3、甲基化可能是腫瘤細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的一部分。在癌組織以及癌旁正常組織中發(fā)現(xiàn)CYP2J2基因甲基化，但是對照組中無1例發(fā)生甲基化，提示CYP2J2基因甲基化可能是腫瘤的特異性改變。因此，CYP2J2基因甲基化可能作為腫瘤早期診斷的標志。
　　 CY

8、P2J2甲基化是否是臨床病理因子之間存在相關(guān)性分析表明CYP2J2甲基化與肺癌病人年齡、腫瘤病理類型、分期、吸煙及生存率之間的沒有明顯的相關(guān)性，但是男性患者的CYP2J2甲基化頻率較女性患者高；另外，CYP2J2基因甲基化與全體肺癌患者（包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌）整體生存率之間沒有明顯的關(guān)系，但是對于非小細胞肺癌患者而言，CYP2J2基因高甲基化的兩年生存率明顯高于CYP2J2基因低甲基化或者未發(fā)生甲基化的患者。
　　 本研

9、究表明CYP2J2是一種新發(fā)現(xiàn)的，在肺癌中高度甲基化的基因。CYP2J2在三種肺癌細胞、56例肺癌組織及相應的癌旁正常組織中均有明顯的甲基化，但是在非腫瘤患者的肺組織中幾乎沒有甲基化；用去甲基化藥物5-Aza-dC處理肺癌細胞可以通過部分逆轉(zhuǎn)CYP2J2基因的甲基化狀態(tài)從而調(diào)節(jié)CYP2J2基因的表達；通過對CYP2J2甲基化與臨床病理因素之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)女性患者的甲基化頻率低于男性患者，而且CYP2J2基因甲基化是非小細胞肺癌患者預