山蒼子油對(duì)小鼠系統(tǒng)性新生隱球菌感染的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：以小鼠的生存率及腎臟、肺臟菌落形成單位計(jì)數(shù)為指標(biāo)，評(píng)價(jià)山蒼子油灌胃治療實(shí)驗(yàn)性小鼠系統(tǒng)性新生隱球菌感染的療效，從而為山蒼子油的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.急性毒性試驗(yàn)：清潔級(jí)昆明種小鼠25只，雌性，體重18～22g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組5只，分別給予山蒼子油800mg/kg、1600mg/kg、2400mg/kg、3200mg/kg、4000mg/kg灌胃一次，連續(xù)觀察7天，記錄小鼠的反應(yīng)及死亡情

2、況，計(jì)算其半數(shù)致死量(LD50)，并將死亡小鼠解剖觀察內(nèi)臟變化情況。2.小鼠系統(tǒng)性新生隱球菌感染模型的建立：清潔級(jí)昆明種小鼠20只，雌性，18～22g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，腹腔注射環(huán)磷酰胺每日200mg/kg進(jìn)行免疫抑制，連續(xù)給藥4天后，將小鼠隨機(jī)分成2組，每組10只，第1組腹腔注射濃度為2×107CFU/ml的新生隱球菌菌懸液0.1ml(2×106CFU/鼠)，第2組腹腔注射濃度為5×106CFU/ml的新生隱球菌菌懸液0.1ml(5×1

3、05CFU/鼠)，分別觀察、記錄兩組小鼠的死亡情況，并將所有死亡小鼠解剖，觀察內(nèi)臟形態(tài)變化，取出小鼠部分內(nèi)臟進(jìn)行真菌逆培養(yǎng)及病理檢查。3.生存保護(hù)試驗(yàn)：清潔級(jí)昆明種小鼠60只，雌性，體重18～22g，制成上述第1組系統(tǒng)性隱球菌感染模型后，將小鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照、山蒼子油和伊曲康唑3組，每組20只，分別給予無(wú)菌生理鹽水0.1ml、山蒼子油40mg/kg、伊曲康唑10mg/kg灌胃治療，均為每天1次、連續(xù)7天，觀察并記錄每組小鼠的生存情況。

4、4.腎臟及肺臟菌落形成單位計(jì)數(shù)：清潔級(jí)昆明種小鼠30只，雌性，18～22g，制成上述第2組系統(tǒng)性隱球菌感染模型后，將小鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照、山蒼子油和伊曲康唑3組，每組10只，分組后即開(kāi)始灌胃治療，每組治療方法及單次劑量同進(jìn)行生存保護(hù)試驗(yàn)的3組小鼠，7天后處死小鼠，取出雙側(cè)腎臟及肺臟，計(jì)數(shù)菌落形成單位數(shù)。 結(jié)果：1.急性毒性試驗(yàn)：觀察至第7天，5組小鼠的死亡數(shù)分別為0、2、5、5、5，計(jì)算其LD50為1670.73mg/kg。最早

5、發(fā)生死亡的時(shí)間為給藥后3小時(shí)，最晚發(fā)生死亡的時(shí)間為給藥后第6天。將死亡小鼠解剖，可見(jiàn)胃腸粘膜充血，而肝、腎、脾、肺、心等臟器未見(jiàn)明顯異常。2小鼠系統(tǒng)性隱球菌感染模型的建立：小鼠死亡后立即解剖，肉眼觀察其腹膜、膈膜及腸壁，均未見(jiàn)明顯病灶，只有部分小鼠肝臟表面出現(xiàn)白色點(diǎn)狀病灶，而將每只小鼠的腎臟、肺臟及部分其它臟器進(jìn)行真菌逆培養(yǎng)時(shí)，均可見(jiàn)隱球菌生長(zhǎng)，病理切片也可看到部分臟器均不同程度受到隱球菌侵犯，說(shuō)明小鼠系統(tǒng)性隱球菌感染模型制造成功。3.

6、生存保護(hù)試驗(yàn)：陰性對(duì)照組20只小鼠，于17天內(nèi)全部死亡，其中最早的死于給菌后第5天，最晚的死于給菌后第17天，中位生存天數(shù)為10天；山蒼子油組和伊曲康唑組最早的分別死于給菌后第7天和第8天，中位生存天數(shù)分別為15天和19天，在28天內(nèi)山蒼子油組全部死亡，而伊曲康唑組仍有7只存活。三組間比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。4.腎臟、肺臟菌落形成單位計(jì)數(shù)：①腎臟：陰性對(duì)照組、山蒼子油組和伊曲康唑組平均腎臟菌落形成單位數(shù)分別為(11.8±

7、1.62)×103CFU/ml、(7.19±1.73)×103CFU/ml和(5.47±1.30)×103CFU/ml，后兩組的菌落數(shù)明顯少于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，而山蒼子油組的菌落數(shù)與伊曲康唑組比較同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。②肺臟：陰性對(duì)照組平均肺臟菌落形成單位計(jì)數(shù)為(10.49±1.32)×102CFU/ml，而山蒼子油組和伊曲康唑組分別為(6.31±1.61)×102CFU/ml、(4.07±1.94)×102CF