脊髓P2Y12受體通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)骨癌痛痛敏形成.pdf

1、本文從以下兩部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 P2Y12受體對(duì)骨癌痛大鼠痛閾及其脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞和p-p38MAPK表達(dá)變化的影響
　　目的：鞘內(nèi)注射MRS2395（P2Y12受體的抑制劑），探討脊髓P2Y12受體在大鼠脛骨癌痛中的作用及其對(duì)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表達(dá)的影響。
　　方法：將40只成年健康雌性SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為5組(n=8):正常組（N組）、偽模型組（S組）、脛

2、骨癌痛模型組（BC組）、DMSO溶劑脛骨癌痛模型組（BCD組）、脛骨癌痛模型鎮(zhèn)痛組（BCM組）。N組大鼠不進(jìn)行任何的處理，S組大鼠在左脛骨上端骨髓腔注入Hank's液10μl，BC組、BCD組、BCM組大鼠在左脛骨上端分別注入經(jīng)腹水傳代培養(yǎng)的Walker256乳腺癌細(xì)胞10μl建立脛骨癌痛模型。除N組以外，其余四組大鼠建模的同時(shí)將選擇腰3-4間隙行鞘內(nèi)置管，建模成功后第9天各組大鼠分別行鞘內(nèi)注藥，S組、BC組分別注射0.9％生理鹽水，B

3、CD組注射5％二甲基亞砜(DMSO)溶劑，BCM組注射MRS2395(400pmol/μ l)，容量各15μ l。鞘內(nèi)給藥前及給藥后每10分鐘測(cè)量大鼠左后足機(jī)械痛閾值。測(cè)定機(jī)械痛閾后，取腰4-6脊髓，采用western-blot方法檢測(cè)脊髓背角P2Y12受體、小膠質(zhì)細(xì)胞和p-p38MAPK表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：建模后第9天，與N組、S組比較，BC組、BCD組、BCM組大鼠左后足機(jī)械痛閾值下降（P＜0.01）;與BC組、BCD

4、組比較，鞘內(nèi)注射P2Y12受體抑制劑后BCM組大鼠機(jī)械痛閾值增高（P＜0.01）。western-blot結(jié)果顯示，與N組、S組相比，BC組脊髓P2Y12受體的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）;與S組相比，BCD組脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞和p-p38MAPK的表達(dá)均上調(diào)(P＜0.05);與BCD組相比，BCM組脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和p-p38MAPK的表達(dá)均下調(diào)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：鞘內(nèi)注射MRS2395可緩解脛骨癌痛大鼠的痛覺(jué)過(guò)敏，P2Y1

5、2受體可能通過(guò)調(diào)節(jié)脛骨癌痛大鼠脊髓背角的小膠質(zhì)細(xì)胞及p38MAPK磷酸化程度部分減輕大鼠骨癌痛覺(jué)過(guò)敏。
　　第二部分 P2Y12受體、p38MAPK對(duì)骨癌痛大鼠痛閾及其脊髓背角炎癥因子表達(dá)的影響
　　目的：觀察鞘內(nèi)注射MRS2395（P2Y12受體抑制劑）、SB-203580(p38MAPK抑制劑)對(duì)骨癌痛大鼠痛閾及其脊髓背角炎性因子表達(dá)的影響，探討P2Y12/p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在骨癌痛發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　

6、方法：成年健康雌性SD大鼠32只，采用隨機(jī)數(shù)字表法平均分為四組(n=8):假手術(shù)組（S組）、DMSO溶劑骨癌痛組(BCD組)、脛骨癌痛MRS2395鎮(zhèn)痛組(BCM組)、脛骨癌痛SB-203580鎮(zhèn)痛組(BCS組)。S組:左脛骨上端骨髓腔注入Hank's液10μl，模型制備成功的第9天鞘內(nèi)注射0.9％生理鹽水15μ l;BCD組:左脛骨上端骨髓腔注入Walker256癌細(xì)胞懸液10μl，模型制備成功的第9天，鞘內(nèi)注射5％二甲基亞砜(DMS

7、O)溶劑;BCM組:左脛骨上端骨髓腔注入Walker256癌細(xì)胞懸液10μl，模型制備成功的第9天，鞘內(nèi)注射MRS2395(400 pmol/μl)15μl;BCS組:左脛骨上端骨髓腔注入Walker256癌細(xì)胞懸液10μl，模型制備成功的第9天，鞘內(nèi)注射SB-203580(2μg/10μl)15μl。骨癌建模的同時(shí)均行腰3-4間隙鞘內(nèi)置管，術(shù)后第9天鞘內(nèi)給藥前及給藥后每10分鐘測(cè)試大鼠左后足機(jī)械痛閡值，測(cè)定機(jī)械痛閾后，取腰4-6脊髓左

8、側(cè)背角，采用western-blot檢測(cè)脊髓背角炎性因子IL-1β、IL-6的表達(dá)。
　　結(jié)果：建模成功后第9天，與S組比較，BCD組、BCS組機(jī)械性痛閾值下降（P＜0.01）;與BCD組比較，BCS組大鼠鞘內(nèi)注SB203580后大鼠機(jī)械痛閾值增高（P＜0.01），且在給藥后3小時(shí)達(dá)到高峰。western-blot結(jié)果顯示:與S組比較，BCD組、BCM組、BCS組大鼠脊髓背角IL-1β和IL-6含量均明顯升高(P＜0.05);與B