雙苯氟嗪對(duì)偏頭痛防治作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、偏頭痛是一種常見(jiàn)多發(fā)的原發(fā)性腦功能性疾病，發(fā)病率國(guó)外為12.9％～17.6％，國(guó)內(nèi)為0.985％，男女比例1:4。因本病反復(fù)發(fā)作遷延難愈，給患者造成極大的痛苦，歷來(lái)被醫(yī)家視為疑難病癥，對(duì)本病發(fā)病機(jī)理及藥物治療成為醫(yī)界關(guān)注的熱點(diǎn)之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病并未形成統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)，最早是1863年Wolff提出的血管源學(xué)說(shuō)，1873年Lieving提出神經(jīng)源學(xué)說(shuō)，20世紀(jì)又進(jìn)一步提出三叉神經(jīng)-血管反射學(xué)說(shuō)(1990年，Moskowitz提出)、皮層擴(kuò)布

2、性抑制學(xué)說(shuō)(CSD，1994年，Leac提出)。上述后三種學(xué)說(shuō)著重于解釋臨床癥狀。近幾年來(lái)對(duì)偏頭痛生化機(jī)制和分子遺傳學(xué)的研究標(biāo)志著研究深入到了細(xì)胞、分子水平。文獻(xiàn)報(bào)道與偏頭痛有關(guān)的體液因子有：5-羥色胺(5-HT)、NO、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、降鈣素基因相關(guān)肽(cGRP)、[Ca2+]i超載等。在偏頭痛的發(fā)作過(guò)程中，始終存在著顱內(nèi)外血管的舒縮障礙，而引起血管舒縮改變的生化因子近年來(lái)也受到重視。然而偏頭痛是一種多因素疾病，

3、其發(fā)病機(jī)制仍尚無(wú)定論，因而還沒(méi)有肯定的根治性治療，只能預(yù)防和控制發(fā)作。常用的預(yù)防性治療藥物包括鈣拮抗劑、三環(huán)類抗抑郁藥、β-受體阻斷劑和抗癲癇藥等。上述諸多證據(jù)表明偏頭痛為一離子通道異常疾病，而鈣通道又在其中起著重要的作用，因此阻斷鈣通道就成為對(duì)偏頭痛預(yù)防性治療的重要策略。 雙苯氟嗪(Dip)是由河北醫(yī)科大學(xué)合成的新一代哌嗪類鈣拮抗藥，為氟桂利嗪的衍生物。前期實(shí)驗(yàn)研究證明雙苯氟嗪可以阻斷細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流，保證細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)定，可選擇

4、性地?cái)U(kuò)張腦血管，改善腦微循環(huán)；此類藥中氟桂利嗪和洛美利嗪均可預(yù)防治療偏頭痛，而雙苯氟嗪作為新一代哌嗪類鈣拮抗藥，故推測(cè)其也可能具有抗偏頭痛作用。為此本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)雙苯氟嗪對(duì)偏頭痛動(dòng)物模型的防治作用進(jìn)行研究，從而為其應(yīng)用于臨床提供客觀而科學(xué)的依據(jù)。 目的：觀察雙苯氟嗪對(duì)實(shí)驗(yàn)性偏頭痛的防治作用及機(jī)制探討。 方法：(1)對(duì)模型小鼠撓頭次數(shù)影響的研究：取昆明種小鼠120只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組(0.5％CMC)、

5、雙苯氟嗪(Dip)1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg劑量組，以及氟桂利嗪3mg/kg陽(yáng)性對(duì)照組，每組20只小鼠。對(duì)每鼠先進(jìn)行灌胃給藥，給藥容積為0.2ml藥物溶液/10g體重，每天一次，連續(xù)3天，正常對(duì)照組給予蒸餾水，模型對(duì)照組以等容量溶劑灌胃。在第3天給藥30min后，除正常對(duì)照組給予等比例生理鹽水外，其余各組均按10mg/kg皮下注射硝酸甘油(NTG)注射液(給藥容積為0.2ml/10g)。而后觀察記錄10min內(nèi)小鼠撓頭的

6、次數(shù)。(2)對(duì)模型小鼠痛閾和凝血時(shí)間影響的研究：取合格昆明種小鼠60只，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組(0.5％CMC)、雙苯氟嗪(Dip)1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg劑量組，以及氟桂利嗪3mg/kg陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只小鼠。除正常對(duì)照組給予等比例生理鹽水外，其余各組均按0.4mg/kg皮下注射利血平(給藥容積為0.2ml/10g)，每天一次，連續(xù)4天，而在造模開(kāi)始第2天一并進(jìn)行灌胃給藥(容積為0.2ml藥物溶液/

7、10g體重)，正常對(duì)照組給予蒸餾水，模型對(duì)照組以等容量溶劑灌胃，其余各組給予指定藥物，連續(xù)5天。于最后一次給藥1h后，熱板法測(cè)定痛閾值，然后摘眼球取血測(cè)凝血時(shí)間。(3)對(duì)NO含量影響的研究：取健康SD大鼠60只，將大鼠按照隨機(jī)性原則分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組(0.5％CMC)、雙苯氟嗪(Dip)0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg劑量組，以及氟桂利嗪1.5mg/kg陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。每鼠先進(jìn)行灌胃給藥，給藥容積為0.5

8、ml藥物溶液/100g體重，每天一次，連續(xù)3天，正常對(duì)照組給予蒸餾水，模型對(duì)照組給以等容量溶劑。在第3天給藥30min后，除正常對(duì)照組給予等比例生理鹽水外，其余各組均按10mg/kg皮下注射硝酸甘油(NTG)注射液(給藥容積為0.25 ml/100g)。4h后頸靜脈取血并制備腦勻漿，按試劑盒操作說(shuō)明分別測(cè)定血漿和腦組織中NO的含量。結(jié)果：(1)撓頭的次數(shù)：雙苯氟嗪(Dip)可以減少造模后10min之內(nèi)偏頭痛小鼠的撓頭次數(shù)，正常對(duì)照組、模

9、型對(duì)照組、氟桂利嗪3 mg/kg組以及雙苯氟嗪三個(gè)劑量組的撓頭次數(shù)分別為：2.2±1.9、19.9±11.8、5.1±3.1、12.4±8.4、6.3±3.6、4.1±3.1。其中,正常對(duì)照組、氟桂利嗪3mg/kg組以及雙苯氟嗪3mg/kg、10mg/kg劑量組與模型組比較具有顯著性差異(P＜0.05)。 (2)痛閾值和凝血時(shí)間：雙苯氟嗪(Dip)可以延長(zhǎng)偏頭痛小鼠凝血時(shí)間，提高其痛閾值。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氟桂利嗪3mg/

10、kg組以及雙苯氟嗪三個(gè)劑量組的痛閾值分別為：17.2±4.7s、23.5±5.6s、34.5±4.9s、31.1±5.0s、33.9±8.2s、35.6±5.1s。與模型組比較，雙苯氟嗪1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg劑量組以及氟桂利嗪組都具有顯著性差異(P＜0.01)。以上各組凝血時(shí)間分別為：43.7±0.7s、36.3±8.7s、42.7±0.8s、40.4±2.9s、42.3±2.2s、43.0±1.3s。結(jié)果顯示：模型

11、對(duì)照組凝血時(shí)間比正常對(duì)照組顯著縮短(P＜0.05)，而雙苯氟嗪三個(gè)劑量組以及氟桂利嗪組凝血時(shí)間長(zhǎng)于模型組，具有顯著性差異(P＜0.05)。 (3)血漿中NO含量的變化：雙苯氟嗪(Dip)可降低由硝酸甘油誘發(fā)的偏頭痛大鼠血漿中NO的含量。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氟桂利嗪1.5mg/kg組以及雙苯氟嗪三個(gè)劑量組血漿中NO的含量分別為：128±24μmol/L、200±21μmol/L、155±29μmol/L、170±19μmol/L、15

12、8±12μmol/L、147±16μmol/L。結(jié)果表明，正常對(duì)照組、氟桂利嗪1.5mg/kg組以及Dip 0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg劑量組均低于模型對(duì)照組(P＜0.01)。 (4)腦組織中NO含量的變化：雙苯氟嗪(Dip)可降低由硝酸甘油誘發(fā)的偏頭痛大鼠腦組織中NO的含量。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氟桂利嗪1.5mg/kg組以及雙苯氟嗪0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg劑量組腦組織中NO的含量

13、分別為：3.3±0.9μmol/g pro、4.7±0.9μmol/g pro、3.4±0.6μmol/gpro、3.4±0.8μmol/g pro、3.3±0.8μmol/g pro、3.3±0.6μmol/g pro。結(jié)果表明，正常對(duì)照組、氟桂利嗪1.5mg/kg組以及Dip 0.5mg/kg、1.5mg/kg、5mg/kg劑量組均低于模型對(duì)照組(P＜0.01)。 結(jié)論：(1)雙苯氟嗪(Dip)可明顯地減少偏頭痛小鼠撓頭的次