基于毛細(xì)管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光的肝病患者血清蛋白質(zhì)檢測(cè)分析.pdf

1、肝硬化和原發(fā)性肝癌在疾病早期，患者無(wú)明顯特異性癥狀，患者確診時(shí)一般已是中晚期，肝硬化、肝癌的早期診斷對(duì)疾病的治療尤為重要。血清蛋白質(zhì)含量的差異是肝硬化、肝癌患者區(qū)別于正常人的特征值之一。近年來(lái)，毛細(xì)管電泳法因其高效分離、快速分析、微量進(jìn)樣等優(yōu)勢(shì)用于蛋白質(zhì)的分離分析已成為研究熱點(diǎn)。毛細(xì)管電泳誘導(dǎo)熒光檢測(cè)法具有較高的靈敏度，在蛋白質(zhì)檢測(cè)方面與紫外吸收檢測(cè)相比，它能更準(zhǔn)確的反映血清中蛋白質(zhì)含量的變化。因此，采用毛細(xì)管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光法

2、對(duì)血清蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，建立正常人、肝硬化和原發(fā)性肝癌患者血清蛋白質(zhì)的毛細(xì)管電泳熒光圖譜，對(duì)比患者與正常人之間血清蛋白質(zhì)的差異，為臨床上肝病的診斷提供參考。
　　研究目的:
　　1.血清蛋白質(zhì)含量的差異是肝硬化、肝癌患者區(qū)別于正常人的特征值之一。本文使用毛細(xì)管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測(cè)法，對(duì)正常人、肝硬化、肝癌患者血清蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，建立正常人、肝硬化、肝癌血清蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳熒光圖譜，對(duì)比三者血清蛋白質(zhì)的差異，輔助臨床上肝

3、硬化、肝癌的早期診斷。
　　2.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，所使用的毛細(xì)管電泳儀在一些結(jié)構(gòu)上存在缺陷，如廢液池的位置、廢液的排出方式等，這些存在的缺陷會(huì)降低檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性。因此，為了準(zhǔn)確地檢測(cè)血清蛋白質(zhì)，對(duì)一些結(jié)構(gòu)進(jìn)行改進(jìn)，以提高毛細(xì)管電泳儀的重復(fù)性。
　　研究方法:
　　1.毛細(xì)管電泳-發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光(CE-LED-IF)檢測(cè)方法中，血清蛋白質(zhì)的檢測(cè)依賴于結(jié)合在蛋白質(zhì)分子上的FITC熒光基團(tuán)，因此，首先對(duì)FITC標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)

4、行CE-LED-IF檢測(cè)，考察電泳儀檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性。研究發(fā)現(xiàn)降低檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性的原因，通過(guò)設(shè)計(jì)合理結(jié)構(gòu)來(lái)消除影響，提高檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性。
　　2.對(duì)CE-LED-IF分離檢測(cè)血清蛋白質(zhì)的各個(gè)影響因素，如光源的選擇、分離毛細(xì)管的長(zhǎng)度、緩沖液pH值、緩沖液濃度、電泳分離電壓、血清稀釋比例、衍生用FITC與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比等進(jìn)行最優(yōu)化選擇。在最優(yōu)化的電泳條件下，對(duì)正常人、肝硬化、肝癌血清進(jìn)行電泳分離分析，建立正常人、肝硬化、肝癌患者的血

5、清蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳熒光圖譜。
　　研究結(jié)果:
　　1.通過(guò)重新設(shè)計(jì)改進(jìn)電泳卡槽上廢液池的位置，消除因毛細(xì)管兩端高度差帶來(lái)的影響。改進(jìn)前后，分別對(duì)2.5×10-3mg/mL FITC進(jìn)行了10次檢測(cè)。改進(jìn)前，F(xiàn)ITC的遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)是8.74％和6.57％，而改進(jìn)后，F(xiàn)ITC的遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)是1.14％和3.23％，說(shuō)明改進(jìn)后的卡槽用于毛細(xì)管電泳-LED誘導(dǎo)熒光檢測(cè)提高了檢測(cè)

6、結(jié)果的重復(fù)性。
　　2.分析比較影響CE-LED-IF檢測(cè)血清蛋白質(zhì)的各個(gè)影響因素:光源、分離毛細(xì)管的長(zhǎng)度、緩沖液pH值、緩沖液濃度、電泳分離電壓、血清稀釋比例、衍生用FITC與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比，確定CE-LED-IF檢測(cè)血清蛋白質(zhì)的最優(yōu)化條件:中心波長(zhǎng)470nm的LED作為激發(fā)光源，分離毛細(xì)管長(zhǎng)度為53cm（有效分離長(zhǎng)度50cm），緩沖液pH值為9.6，緩沖液濃度為10mmol/L，電泳分離電壓為20kV，血清稀釋比例為1∶40，

7、衍生用FITC與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比為3∶20。
　　3.在最優(yōu)化的電泳條件下，對(duì)60例正常人、肝硬化、肝癌患者的血清進(jìn)行了電泳分離分析，建立了正常人、肝硬化、肝癌患者的血清蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳熒光圖譜。肝硬化、肝癌血清蛋白質(zhì)毛細(xì)管電泳熒光圖譜中，有區(qū)別于正常人圖譜的特征蛋白質(zhì)峰。
　　研究結(jié)論:
　　1.電泳卡槽的結(jié)構(gòu)改進(jìn)合理，提高了LED誘導(dǎo)熒光-毛細(xì)管電泳檢測(cè)的重復(fù)性。
　　2.電泳分離的影響因素，如光源的選擇、分離