PEG藻藍蛋白亞基脂質(zhì)體光動力學治療乳腺癌的實驗研究.pdf

1、乳腺癌是世界上僅次于肺癌的發(fā)病率最高的惡性腫瘤,是第五大死亡性腫瘤疾病。目前乳腺癌主要的治療方法有手術(shù)、化療、放療和激素療法。隨著人們傳統(tǒng)觀念的改變,既力求治愈,又保功能,而且美觀,以上已不能完全滿足患者的要求。PDT是通過光照光敏劑富集的組織,激發(fā)其發(fā)生光敏效應,產(chǎn)生活性氧,從而破壞組織。PDT是治療體表腫瘤的一種新的療法,臨床上已經(jīng)運用其治療乳腺癌和其他原發(fā)性惡性腫瘤并取得了良好的療效。
　　藻藍蛋白(Phycocyanin,

2、PC)是螺旋藻中含有的一種重要的捕光色素蛋白,由開鏈四吡咯化合物和脫輔蛋白通過硫鏈鍵結(jié)合[1],由α和β兩種亞基組成,天然狀態(tài)下以(αβ)3或者(αβ)6等雜聚體形式存在,α和β亞基的分子量分別為17KD和21KD[2]。在中性條件,藻藍蛋白在635nm光激發(fā)下,其熒光發(fā)射光譜峰位于650nm處[3]顯示出紅色的熒光。PC是一種無毒副作用的理想光敏劑[4]。黃蓓等[7]純化出藻藍蛋白的三個組分,在濃度為100μg/ml,照射劑量28.8

3、 J/cm2時,它們對腫瘤細胞的殺傷率達69.2％～80.2％,同時也證明,藻藍蛋白的酶解產(chǎn)物介導的PDT可以對小鼠移植瘤S180有46~81％的抑瘤率。譚陽[5]等發(fā)現(xiàn)藻藍蛋白的α,β亞基也具有很好的體外腫瘤細胞光敏效果。
　　由于藻藍蛋白作為光敏劑應用有生物體內(nèi)不穩(wěn)定,靶向性不高等缺點,所以要為藻藍蛋白設計一種靶向制劑。目前常用脂質(zhì)體來提高PDT中光敏劑的靶向性,一般來說,普通脂質(zhì)體攜帶的光敏劑在腫瘤組織和普通組織中的分布并無

4、顯著區(qū)別,腫瘤靶向性不很明顯,相反的,經(jīng)過特殊修飾的脂質(zhì)體如長循環(huán)脂質(zhì)體有很好的腫瘤靶向性[6]。聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體能夠逃脫網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)從而提高脂質(zhì)體在腫瘤組織中的含量[7],文獻顯示photofrin PEG脂質(zhì)體提高了體外實驗的光毒性[8]。
　　本實驗采用薄膜水合—超聲分散法制備藻藍蛋白亞基脂質(zhì)體(PEG-PCS-LIP)，MTT法檢測藻藍蛋白亞基脂質(zhì)體對MCF-7(人乳腺癌細胞)，MA-782(鼠乳腺癌細胞)的光動力殺傷

5、效果,流式細胞術(shù)(FCM)分析其對腫瘤細胞周期的影響,吖啶橙染色觀察細胞形態(tài),確定PEG-PCS-lip的最佳作用時間和濃度,通過細胞細胞周期和細胞形態(tài)的變化分析PDT作用的機理;乳腺癌荷瘤小鼠尾靜脈注射10mg/kg PEG-PCS-LIP,研究PEG-PCS-LIP在小鼠體內(nèi)的各組織的分布及代謝規(guī)律,摸索光動力治療的最佳條件,為光動力學療法治療乳腺癌小鼠研究提供基礎(chǔ)參數(shù)。
　　結(jié)果顯示:PEG-PCS-Lip介導的PDT作用對

6、乳腺癌細胞有良好的光動力療效,對MCF-7及MA-782細胞IC50(半數(shù)抑制濃度)分別為68μg/mL、70μg/mL。FCM的結(jié)果顯示,當PEG-PCS-lip濃度為50μg/mL時,腫瘤細胞凋亡率約為30.5％。對荷瘤小鼠的藥代動力學實驗顯示,腫瘤組織中PEG-PCS-LIP的含量大于其他組織,且與其他組織相比,PEG-PCS-LIP在腫瘤組織中滯留的時間較長,濃度較大。靜脈注射10～12 h時,腫瘤中PEG-PCS-LIP濃度達