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文檔簡介
1、病原微生物對自身生命活動的調(diào)控、進(jìn)化集中體現(xiàn)在與宿主的相互作用、攻防博弈中。丁香假單胞菌番茄致病變種Pseudomonas syringae pv.tomato(Pst)是引起細(xì)菌性斑點(diǎn)病影響番茄產(chǎn)量和品質(zhì)的病原微生物。P.syringae pv.tomato與其宿主植物番茄之間的相互作用也是研究病原微生物-植物相互作用的一個(gè)重要模式。Pto是植物識別、防御丁香假單胞菌的抗性蛋白。Pto可以識別結(jié)合病原菌注入植物細(xì)胞的效應(yīng)蛋白AvrPt
2、oB、AvrPto,并由此觸發(fā)下游防御反應(yīng),最終在侵染部位產(chǎn)生超敏反應(yīng)誘導(dǎo)組織壞死,防止病原菌的定殖和繁殖。因此,Pto成為病原微生物-植物相互作用的一個(gè)樞紐蛋白,但Pto介導(dǎo)的免疫途徑的框架仍未完整闡明。
本文通過克隆番茄Pti(Pto interaction protein)基因Pti4、Pti5和Pti6,分別構(gòu)建植物瞬時(shí)表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法在煙草葉片中進(jìn)行表達(dá),并進(jìn)一步利用免疫共沉淀技術(shù),在植物體系中檢測它們與
3、番茄Pto、病原菌效應(yīng)蛋白AvrPtoB的相互作用。同時(shí),通過Pti4、Pti5和Pti6基因載體構(gòu)建、番茄遺傳轉(zhuǎn)化,獲得過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株。通過病原菌Pst DC3000接種,檢測Pti基因在番茄防御丁香假單胞菌侵襲中的作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,利用所構(gòu)建Pti4、Pti5和Pti6基因植物表達(dá)載體,在煙草中獲得了預(yù)期大小Pti4、Pti5和Pti6蛋白,并在植物體系中驗(yàn)證了它們與Pto蛋白,及其活性突變體PtoY207D的相互
4、作用,表明Pti蛋白參與Pto介導(dǎo)的植物免疫應(yīng)答途徑,但它們相互作用強(qiáng)弱的差異,則提示Pti4、Pti5和Pti6蛋白可能在具體功能作用中有所不同。通過免疫共沉淀進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),Pti4、Pti5和Pti6蛋白與病原菌效應(yīng)蛋白AvrPtoB有相互作用。AvrPtoB與Pti蛋白的互作是否使其成為病原菌毒性效應(yīng)蛋白的靶標(biāo),還是促進(jìn)Pto蛋白對AvrPtoB的識別,仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討。此外,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化,獲得了Pti4、Pti5基
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