牛早期卵母細(xì)胞和成熟前后的超微結(jié)構(gòu)變化.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)用透射電子顯微鏡觀察體外成熟前后牛GV期卵母細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，以及牛卵巢上不同發(fā)育時期卵母細(xì)胞過程中超微結(jié)構(gòu)的變化，旨在為胚胎工程等相關(guān)研究提供依據(jù)。 選擇剛出生不久牛的卵巢和大量的性成熟前牛的卵巢作為研究對象進(jìn)行電鏡觀察。電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，卵原細(xì)胞具有一個大的圓形細(xì)胞核，初級卵母細(xì)胞前細(xì)線期和細(xì)線期，細(xì)胞核基質(zhì)中出現(xiàn)電子致密的線狀結(jié)構(gòu)，此時細(xì)胞核偏向于一側(cè)，初級卵母細(xì)胞雙線期出現(xiàn)了燈刷染色體。卵原細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中僅有少數(shù)的線

2、粒體，線粒體的密度中等，初級卵母細(xì)胞前細(xì)線期和細(xì)線期，發(fā)現(xiàn)在Mi之間存在顆粒狀或纖維狀物質(zhì)，雙線期線粒體呈圓形，嵴很少，呈板狀，有的甚至不見嵴：有腔卵母細(xì)胞是線粒體數(shù)量增多，呈圓形或橢圓形，基質(zhì)電子密度較高，并進(jìn)一步向皮質(zhì)區(qū)遷移；直徑2mm以上卵泡中卵母細(xì)胞的線粒體轉(zhuǎn)變?yōu)閹本€粒體。卵原細(xì)胞與濾泡細(xì)胞之間的距離很小，濾泡細(xì)胞的核呈多形性；初級卵母細(xì)胞與相伴的卵泡細(xì)胞間靠得很緊密，二者間僅有窄小的間隙；有腔的卵母細(xì)胞與濾泡細(xì)胞之間的距離變

3、大，濾泡細(xì)胞的核呈圓形。卵原細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中溶酶體含量較少；前細(xì)線期和細(xì)線期的初級卵母細(xì)胞溶酶體的數(shù)量增加，溶酶體和線粒體結(jié)構(gòu)緊貼，卵丘細(xì)胞質(zhì)中的溶酶體和線粒體密集分布；雙線期的初級卵母細(xì)胞有大量體積小、電子密度較高的溶酶體，這些溶酶體常常聯(lián)合在一起形成大的多泡體；有腔卵母細(xì)胞時，球狀的溶酶體變成線狀的溶酶體。卵原細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中囊泡數(shù)量較少，分布均勻；初級卵母細(xì)胞的前細(xì)線期和細(xì)線期數(shù)量顯著增加且偏向于細(xì)胞的一側(cè)；初級卵母細(xì)胞的雙線期有的囊

4、泡聚集在一起，大多有膜包圍，電子密度極低，囊泡中似乎沒有其他內(nèi)容物；有腔卵母細(xì)胞時，有些囊泡中能看到一些絮狀物，囊泡數(shù)量明顯減少。以上關(guān)于牛初級卵母細(xì)胞不同時期超微結(jié)構(gòu)變化的研究結(jié)果此前尚未見有相關(guān)報道。在牛的原始卵母細(xì)胞質(zhì)中，未見有皮質(zhì)顆粒；在初級卵母細(xì)胞前細(xì)線期和細(xì)線期皮質(zhì)區(qū)出現(xiàn)比較少的明粒皮質(zhì)顆粒；初級卵母細(xì)胞的雙線期皮質(zhì)區(qū)顆粒密集；有腔卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒比較豐富，有四、五層，大部分位于皮質(zhì)區(qū)，這時皮質(zhì)顆粒為暗粒。此外，牛卵巢上有些

5、卵母細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞核皺縮、細(xì)胞器膨脹、自噬泡堆積，導(dǎo)致卵母細(xì)胞退化現(xiàn)象的發(fā)生；有些卵原細(xì)胞的細(xì)胞核與脂滴相伴存在；初級卵母細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)暈輪結(jié)構(gòu)。 直徑為2～8mm卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)24h后的卵母細(xì)胞，透明帶有增厚的趨勢；但體外成熟的卵母細(xì)胞要比體外未成熟的卵母細(xì)胞和體外成熟后去級體卵母細(xì)胞增加的厚度要小。體外培養(yǎng)24h后的成熟卵母細(xì)胞，表面微絨毛又細(xì)又長，都出現(xiàn)了倒伏現(xiàn)象；體外未成熟的卵母細(xì)胞微絨毛卻變得又短又粗，未見倒伏，體外

6、成熟后去級體卵母細(xì)胞微絨毛變得稀少。體外培養(yǎng)后的卵母細(xì)胞，脂肪滴的直徑有增大的趨勢；而體外培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞，脂肪滴有兩種密度類型，并相伴存在，且其直徑大小略有增加；體外培養(yǎng)未成熟的卵母細(xì)胞，脂肪滴顯著變大，但密度不均一；體外培養(yǎng)成熟后又去極體的卵母細(xì)胞，與對照組比較，脂肪滴略有變大，但變化幅度不大，也有些脂肪滴的直徑表現(xiàn)下降的趨勢。三種處理的卵母細(xì)胞中，帽狀線粒體、異常線粒體的含量都有下降的趨勢；但體外成熟的卵母細(xì)胞中帽狀線粒體含量的