生姜對實驗性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用與機(jī)理研究.pdf

1、目的： 1.采用公認(rèn)的大鼠局灶性腦缺血模型和可靠的觀察指標(biāo)，研究生姜對腦缺血確切的治療作用。 2.研究和比較生姜不同提取物對腦缺血的治療作用，根據(jù)量效關(guān)系，尋找各提取物的有效劑量，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 3.根據(jù)腦缺血再灌注損傷的病理生理機(jī)制，采用全腦缺血再灌注和局灶性腦缺血再灌注兩種動物模型，通過對腦組織能量代謝、Ca<'2+>含量、氧化應(yīng)激、氨基酸遞質(zhì)、細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的檢測，研究生姜水提物對腦缺血再灌

2、注損傷的保護(hù)作用機(jī)制。 4.根據(jù)缺血性腦血管病后遺癥常伴有認(rèn)知功能障礙的特點，采用結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈反復(fù)缺血再灌注的方造成腦缺血認(rèn)知功能障礙模型，通過對空間學(xué)習(xí)記憶能力、中樞膽堿能神經(jīng)功能和氧化應(yīng)激等指標(biāo)的測定，研究生姜對腦缺血后遺癥認(rèn)知功能障礙的改善作用及可能的作用機(jī)理。 方法： 1.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、川芎嗪組、生姜汁高劑量組、中劑量組和低劑量組，開顱直接阻斷大鼠一側(cè)大腦中動脈造成局灶

3、性腦缺血模型(MCAO)，灌胃給藥5天，積分法測定MCAO大鼠神經(jīng)病學(xué)癥狀等級，避暗法測定被動性條件反射潛伏期和錯誤次數(shù)，氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法測定大腦梗死面積。 2.昆明種小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、尼莫地平組和揮發(fā)油、乙醇提取物、水提取物、混合物各三個劑量組，共15組。灌胃給藥3天，采用結(jié)扎小鼠雙側(cè)頸總動脈反復(fù)缺血再灌注模型(CIR)，干濕重法測定腦組織含水量，化學(xué)比色法測定腦組織Na<'+>，K<'+>-A

4、TP酶、Ca<'2+>-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。 3.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、尼莫地平組、生姜水提物高劑量組、中劑量組和低劑量組，采用Pdsinelli's四動脈阻斷法造成大鼠全腦缺血再灌注損傷模型(CIR)，分別于手術(shù)前1日、術(shù)前1h和再灌注前30min灌胃給藥，共3次。全自動凝血分析儀測定血漿凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原

5、含量(FIB)，干濕重法測定腦組織含水量，高效液相色譜法測定腦組織谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)含量，原子吸收分光光度計測定腦組織Na<'+>、K<'+>、Ca<'2+>含量，光化學(xué)比色法測定腦組織Na<'+>，K<'+>-ATP酶、Ca<'2+>-ATP酶、SOD活性和MDA含量。 4.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、尼莫地平組、生姜水提物高劑量組、中劑量組和低劑量組。采用線拴法造成大鼠局灶性

6、腦缺血再灌注損傷模型，分別于手術(shù)前24h、術(shù)前1h和再灌注后12h灌胃給藥，共3次。末端脫氧核糖核酸介導(dǎo)生物素化脫氧尿嘧啶缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法測定大腦皮層和海馬凋亡神經(jīng)元，免疫組織化學(xué)方法研究大腦皮層和海馬神經(jīng)元capase-3、bcl-2和bax基因表達(dá)，HE染色觀察大腦皮層和海馬組織病理形態(tài)學(xué)改變。 5.SD雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、石杉堿甲組、生姜水提物高劑量組、中劑量組和低劑量組。采用反復(fù)結(jié)扎與開放雙

7、側(cè)頸總動脈的方法復(fù)制大鼠腦缺血再灌注認(rèn)知功能障礙模型，術(shù)后第15天灌胃給藥，每天1次，連續(xù)20天。采用morris水迷宮定位航行實驗和空間探索實驗測定大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力，光化學(xué)比色法測定大腦皮層和紋狀體乙酰膽堿酯酶(AchE)活性、SOD活性和MDA含量。 結(jié)論： 1.生姜及其揮發(fā)油、水提物和醇提物對實驗性腦缺血及缺血再灌注腦損傷具有明顯的保護(hù)作用。 2.生姜水提物可通過阻滯細(xì)胞內(nèi)鈣超載、減輕興奮性氨基酸神經(jīng)毒性