人MBL的突變型哺乳細(xì)胞表達(dá)和野生型原核表達(dá)的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)是C型凝集素超級(jí)家族中膠凝素家族成員.它可選擇性識(shí)別多種病原體表面的糖結(jié)構(gòu),以不依賴抗體和C1q的方式激活補(bǔ)體,發(fā)揮溶破和間接調(diào)理功能,還能與吞噬細(xì)胞膠凝素受體結(jié)合而起直接調(diào)理作用.已發(fā)現(xiàn)3個(gè)可引起免疫缺損的MBL結(jié)構(gòu)基因點(diǎn)突變——CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA,其編碼產(chǎn)物氨基酸均發(fā)生改變,可導(dǎo)致血清MBL水平低下.該實(shí)驗(yàn)室近幾年的工作主要是M

2、BL缺損,其中一個(gè)重要方面就是MBL缺損發(fā)病機(jī)理的研究,意欲重點(diǎn)闡明2個(gè)問(wèn)題:MBL基因突變?nèi)绾我鹧錗BL水平低下?突變MBL蛋白的功能有否缺陷?該實(shí)驗(yàn)以GGC54GACMBL突變?yōu)檠芯繉?duì)象,選用真核表達(dá)質(zhì)粒pCI-neo,根據(jù)已構(gòu)建好的含54位密碼子突變型MBL基因T載體的結(jié)構(gòu),設(shè)計(jì)合成新的引物,PCR擴(kuò)增54位密碼突變型MBL基因,凝膠回收,雙酶切PCR產(chǎn)物和pCI-neo質(zhì)粒,T4連接酶連接,將前者克隆至后者的Sma Ⅰ和Sd

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